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————————————————————————————————————————————————————— _2枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的研究 ※生物工程食品科学 2009, Vol. 30, No. 23347 枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的研究 姚 刚，程建军*，孙 鹏，李倪薇 (东北农业大学食品学院，黑龙江 哈尔滨 150030) 摘 要：对枯草芽孢杆菌发酵产碱性蛋白酶的培养基成分及培养条件进行优化。在单因素试验的基础上通过正交试验确定发酵培养基各成分最适宜配比。采用此优化培养基对发酵菌株的培养条件进行单因素试验。结果表明最佳的发酵培养基成分为：酵母浸粉2%、蔗糖1.0%、吐温-80 0.5%、硫酸镁0.02%；发酵条件为：接种量4%(V/V)、起始pH9，在150ml的三角瓶中，装液量为25ml，发酵36h。在最佳培养条件下，碱性蛋白酶粗酶活力可达1670U/ml。 关键词：碱性蛋白酶；枯草芽孢杆菌；发酵；培养基 Preparation of Alkaline Protease by Fermentation of Bacillus subtilis YAO Gang，CHENG Jian-jun*，SUN Peng，LI Ni-wei (College of Food Science, Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China) Abstract：Medium compositions and fermentation conditions for producing alkaline protease through the fermentation ofBacillus subtilis were optimized by orthogonal design based on single factor experiments. Results indicated that optimal mediumcompositions were 2% yeast powder, 1.0% sugar, 0.5% Tween 80, and 0.02% MgSO4. The optimal fermentation condition was4% inoculation amount in 25 ml of medium filled in 150 ml Erlenmeyer flasks at the initial pH 9 for 36 h of fermentation. Theactivity of alkaline protease obtained at this optimal fermentation condition was 1670 U/ml.Key words：alkaline protease；Bacillus subtilis；fermentation；medium 中图分类号：Q935 文献标识码：A 文章编号：1002-6630(2009)23-0347-05 碱性蛋白酶是指在pH值为碱性的条件下水解蛋白质肽键的酶类，其最适pH值一般为9～11，属内肽酶中的丝氨酸蛋白水解酶类，除可催化蛋白质水解为氨基酸外，在有机溶剂中还可催化多肽的合成[1]。它在商业中的巨大应用前景及在基础研究中的重要作用，吸引着国际国内的许多公司及研究单位竞相对其进???多方面的研究[2]。微生物蛋白酶均为胞外酶，与动、植物源蛋白酶相比具有下游技术处理相对简单、价格低廉、来源广、菌体易于培养、产量高、高产菌株选育简单、快速、具有动植物蛋白酶所具有的全部特性，同时易于实现工业化生产[3]。而且碱性蛋白酶比中性蛋白酶具有更强的水解能力和耐碱能力，有较大耐热性且有一定的酯酶活力[4]。枯草芽孢杆菌是生产碱性蛋白酶的传统菌株，具有产蛋白酶量大，耐高温、高碱等特点，因此对枯草芽孢杆菌碱性蛋白酶的研究成为蛋白酶研究的热点[5]。我国研究和生产的碱性蛋白酶的活力水平虽然 收稿日期：2009-07-19 不断提高，但大多数采用进口的碱性蛋白酶制剂，并且大规模工业生产中用的碱性蛋白酶还是主要依赖进口[6]。本实验通过正交试验优化枯草芽孢杆菌发酵培养基，以期进一步提高枯草芽孢杆菌所产碱性蛋白酶粗酶的活力。１1.1 材料与方法 菌株 枯草芽孢杆菌(Baci11us subti