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EMMPRIN和MMP2的表达与大肠癌临床病理学的关系及意义 作者：李晓莉 作者单位：中南大学湘雅医院卫生部肝胆肠外科研究中心，湖南 长沙 410008 【摘要】 目的： 探讨大肠癌组织EMMPRIN和MMP2蛋白的表达意义. 方法: 大肠癌患者108例，以正常结、大肠黏膜30例作为对照，应用SABC免疫组化方法检测EMMPRIN和MMP2蛋白的表达. 结果: 大肠癌组织EMMPRIN和MMP2蛋白的阳性表达率分别为81.5%(88/108) 和86.1%(93/108)，明显高于正常大肠黏膜组织(6.7%和20.0%，P0.01). EMMPRIN和MMP2在中、低分化癌中的强阳性表达率高于高分化癌(P0.05)；浆膜浸润及淋巴结转移组的强阳性率高于无浸润及淋巴结转移组(P0.01)；Dukes C～D 期的强阳性表达率高于Dukes A～B 期(P0.01). EMMPRIN和MMP2的表达一致率为91.4%(85/93)，Spearman 等级相关性检验分析表明大肠癌组织中EMMPRIN的表达和MMP2的表达之间呈正相关(r=0.608，P0.01). 结论： EMMPRIN和MMP2与大肠癌的发生、浸润、转移有关，可作为新的大肠癌标记物用于联合检测，具有重要的临床意义. 【关键词】 EMMPRIN 明胶酶A 结肠肿瘤 病理学 临床 　　0引言 　　大肠癌是消化道的常见恶性肿瘤之一，临床上多根据肿瘤大小、淋巴结转移情况、病理学分期及组织学分级，来判断其病程及预后. 近年来，随着分子生物学技术的迅速发展，许多蛋白质分子标记物已被用于恶性肿瘤的诊断. 恶性肿瘤的侵袭生长是瘤细胞、宿主细胞及细胞外基质(extracellular matrix, ECM)之间涉及到信号传导、基因、酶类及ECM 等多方面因素的一系列复杂、多步骤相互作用的结果. 在整个侵袭过程中，蛋白酶对ECM 的降解是瘤细胞侵袭转移的关键［1-2］. 其中，基质金属蛋白酶类（MMPs）在细胞外基质降解过程中起了主导作用［3］. 而细胞外基质金属蛋白酶诱导因子（extracellular matrix metalloproteinase inducer，EMMPRIN）在恶性肿瘤细胞膜上有较强的表达；它能诱导MMPs在肿瘤细胞表面的表达和活化，因此瘤细胞可通过其表面的EMMPRIN 分子作用邻近的正常细胞，使其表达并分泌MMPs，降解细胞外基质，从而促进肿瘤的侵袭与转移［4-5］. 我们应用免疫组织化学方法检测了大肠癌组织中EMMPRIN和MMP2蛋白的表达，探讨二者与大肠癌临床病理学的关系及其临床意义. 　　1对象和方法 　　1.1对象 　　200501/200712大肠癌手术标本108(男65，女43)例；年龄42.6±11.8(30～75)岁. 全部获病理学诊断. 患者术前均未行化学治疗或放疗. 另取正常直、结肠黏膜组织30例作对照.108例大肠癌患者中高中分化腺癌80 例，低分化腺癌28例；有浆膜浸润者49例，无浆膜浸润者59例；有淋巴结转移者48例，无淋巴结转移者60例； DukesA～B 期58例， C～D 期50例. 　　1.2方法 　　采用免疫组织化学染色SABC法，鼠抗人EMMPRIN mAb（工作浓度1∶100）、鼠抗人MMP2 mAb（工作浓度1∶50）和链霉菌抗生素蛋白过氧化物酶法染色试剂盒均为Santa Cruz 公司生产，购自北京中山生物技术有限公司. 标本经40 g/L中性多聚甲醛固定，石蜡包埋，4μm 连续切片，70℃烤片15 min，梯度乙醇脱水，30 mL/L H2O2灭活内源酶，PBS 漂洗5 min×3次. 正常羊血清室温孵育15 min. 滴加20～30 μL PBS 稀释的一抗，4℃过夜. PBS 漂洗5 min×3 次. 二抗、三抗依次37℃孵育45 min，PBS 漂洗5 min×3次. DAB显色5～10 min，自来水充分洗涤，苏木素复染5 min，稀盐酸淡化30 s，冲洗5 min. 脱水、透明、封片，镜检. 阴、阳性对照均常规处理. EMMPRIN蛋白表达阳性为细胞膜和细胞质出现棕黄色颗粒. MMP2的阳性表达是在细胞膜上出现棕褐色颗粒. 根据显色强度和范围分为［6-7］阴性(-)，阳性细胞数5%；弱阳性(＋)，阳性细胞数占5%～25%；中等阳性()，阳性细胞数占25%～50%；强阳性()，阳性细胞数50%. 　统计学处理：所有数据用SPSS13.0处理, 计量资料均用x±s形式表示；对于2×2四格表资料采用Fishers exact test分析，非四格表资料采用χ2检验. Spearman 等级相关性检验分析EMMPRIN和MMP2蛋白的表达相关性. P0.0