威灵仙皂苷you导MR-,2-细胞凋亡的实验研究.pdfVIP

威灵仙皂苷诱导MR。细胞凋亡的实验研究 摘 目的：研究威灵仙皂苷是否能够诱导耐全反式维甲酸急性早幼粒 细胞白血病细胞株(MR2细胞株)凋亡，以期望寻找一种治疗急性早 幼粒细胞白血病耐药患者的新药，尽可能的减轻临床症状，提高生存 藿I叠毫誓霉，▲曩1I■r 质量，防止复发转移，延长生存期。方法：根据文献自行提取威灵仙 基的25IIll培养瓶中，置于37℃、5％C02、饱和湿度的培养箱中培养， 每3～5天传代一次，取对数生长期的细胞作实验对象，将细胞浓度调 整为1×104个触的细胞悬液接种于96孔酶标板，每孔加细胞悬液 100ul，共设8个实验组(每组5个平行孔，并重复实验3次)，以终 照组，终浓度200 u咖l、400u∥【Ill、600u咖l、800u酌：11l、looOu酌：Ill、 一 1200 ug／hd威灵仙皂苷为实验组，用WST-1法观察不同浓度不同时 间威灵仙皂苷对MR2细胞的增殖抑制作用；调整细胞浓度为1×106 ． 个触接种子六孔板，设五个实验组(每组设三个平行对照，实验重 砷酸为阳性对照组，终浓度800 ug／ml、1000u咖1、1200u咖1威灵 仙皂苷为实验组，作用MR2细胞72小时后用流式细胞仪观察MR2 细胞的凋亡率；调整细胞浓度为4×105个／ml接种于六孔板，设五个 l％DMSO 实验组(每组设三个平行对照，实验重复三次)，以终浓度O．O 为空白对照组，终浓度1umol／l亚砷酸为阳性对照组，终浓度200 ug／111l、400u酌【Ill、600u∥IIll、800u酌：11l、1000u∥n11、1200u卧n1威 v-FITC染色 灵仙皂苷为实验组，作用MR2细胞72小时后用心mexill 荧光显微镜观察细胞凋亡形态，并应用统计学分析实验结果。结果： WST-1法结果显示不同浓度的威灵仙皂苷(200 u酣【111、400u酌[111、 600 ug触、800u咖1l、looOu卧11l、1200u咖1)对蛾细胞均有明 显的增殖抑制作用，且呈时间和浓度依赖性。可明显抑制MR2细胞 的增殖并随着威灵仙皂苷浓度的增加、作用时间的延长而抑制作用增 强，且高浓度的威灵仙皂苷组与亚砷酸组对MR2细胞增殖抑制作用 无统计学差异；应用流式细胞仪技术可明显检测到MR2细胞的凋亡 且随浓度的增加而凋亡率升高，亚砷酸组与皂苷1200 u咖l组之间差 异无统计学意义；亚砷酸组和皂苷1200u咖l组与皂苷800u∥ml、 1000u鲂：111组间差异有统计学意义；皂苷800u鲋m组与皂苷 V是一种分子量为 1000u酌：111组间差异有统计学意义。知m耐n · 35~36I①的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸有高度亲和 力，可在细胞凋亡时与翻向外侧的磷脂酰丝氨酸胞膜结合，使其荧光 信号呈绿光；PI作为_种核酸染料，它不能通过完整的细胞膜，但在 细胞凋亡时和细胞死亡时能通过细胞膜使细胞核染色，其荧光信号呈