家蝇幼虫抗菌肽defensin基因的克隆、表达、纯化及抑菌、抑肿瘤活性研究-cloning, expression and purification of the antibacterial peptide def sin gene from musca domestica larvae and study on its antibacterial and antitumor activities.docxVIP

山西医科大学硕士学位论文 山西医科大学硕士学位论文 PAGE PAGE 1 缩略词 （Abbreviation） 缩略词 英文全称 中文全称 aa Amino acid 氨基酸 AMP Antimicrobial Peptide 抗菌肽 AP Ammonium Persulfate 过硫酸铵 bp Base Pair 碱基对 β-ME β-mercaptoethanol β-巯基乙醇 cDNA Complementary DNA 互补 DNA dNTP Deoxyribou nucleotide triphos phate 脱氧核糖核苷三磷酸 E.coli Escherichia coli 大肠杆菌 EDTA Ethylene diaminetetraacetic acid 乙二胺四乙酸钠 FBS fetal bovine serum 胎牛血清 FCM Flow cytometry 流式细胞技术 HepG2 Human hepatoma cell line 人肝癌细胞 IC50 Median inhibitory concentration 半数抑制浓度 IPTG Isopropyl thio-β-D-galactoside 异丙基硫代--β-D-半乳糖 IR Inhibition ratio 抑制率 LB Luria-Bertani medium 培养基 MD Mature defensin 防御素成熟肽 Min Minute 分钟 Mr Molecular weight 分子量 MTT Methyl thiazolyl tetrazolium 四甲基偶氮噻唑蓝 OD Optical density 吸光度 PCR Polymerase chain reaction 聚合酶链式反应 PBS Phosphate-buffered saline 磷酸盐缓冲液 PAGE Polyacrylamide Gel Electrophoresis 聚丙烯酰胺凝胶电泳 SDS Sodium dodecyl sulphate 十二烷基硫酸钠 SIHA The cervical squamous cancer cells 人子宫颈鳞癌细胞 SW480 colon cancer cell 人结肠癌细胞 Tricine N-Tris(hydroxymethyl)Methyl glycine 三羟甲基甘氨酸 Tris Tris-(hydroxymethyl)-aminomethane 三（羟甲基）氨基甲烷 RT-PCR Reverse Transcription Polymerase Chain 逆转录聚合酶链式反应 Reaction 家蝇幼虫抗菌肽 defensin 基因的克隆、表达、纯化及抑菌、 抑肿瘤活性研究 中文摘要 实验目的 1. 在实验研究过程中我们对家蝇抗菌肽防御素(defensin)基因进行生物信息 学的分析；并应用分子生物学方法从家蝇幼虫体内提取抗菌肽防御素(defensin) 基因，并对该基因进行克隆、表达与纯化。 2. 鉴定已纯化的家蝇幼虫抗菌肽防御素成熟肽(MD)部分对大肠杆菌 E.coli K12D31 的 抑 制 作 用 ； 观 察 抗 菌 肽 防 御 素 成 熟 肽 (MD) 对 肿 瘤 细 胞 HepG2,SIHA,SW480 和对人正常心肌细胞 H9C2 的抑制及杀伤作用；比较该防御 素成熟肽(MD)与羟基脲分别对肝癌细胞 HepG2 的作用效果。 3. 观察家蝇幼虫抗菌肽防御素成熟肽(MD)对肝癌细胞 HepG2 细胞周期的影 响；观察家蝇幼虫抗菌肽防御素成熟肽(MD)对肝癌细胞 HepG2 细胞凋亡的影响； 观察家蝇幼虫抗菌肽防御素成熟肽(MD)对肝癌细胞 HepG2 凋亡蛋白半胱天冬氨 酸蛋白酶-3(caspase-3)的影响，从而探究抗菌肽防御素成熟肽(MD)杀伤肝癌细胞 HepG2 的作用机制与原理。 实验方法 我们对家蝇抗菌肽防御素(defensin) 基因的主要特性进行生物信息学的分 析。应用蛋白质分析专家系统（ExPASy）上的 SOSUI、 ProtParam、HNN、 TMHMM、MotifScan 和 NCBI 上的 ORF finder、Bcepred 等生物信息学在线分 析软件进行分析，并结合 DNAman、Gene Runner 等生物信息学分析软件进行分 析、预测家蝇抗菌肽防御素 defensin 蛋白的可溶性及理化性质、翻译后修饰位 点、跨膜区、亲（疏）水性、二级结构、三级结构及同源性分析，以及遗传关 系的比对等。 在 Genbank 中检索家蝇 defensin 基因，根据其设计特异性引物，我们在家 蝇幼虫组织中提取 RNA,