第22章 节 免疫学检测23章 节 免疫学防治.pptVIP

应用酶标记的抗体与组织或细胞抗原发生反应，结合形态学观察，对组织或细胞表面抗原进行定性、定量、定位。 4）免疫细胞或免疫组化技术 ICC IHC 乃用放射性核素标记抗原或抗体进行免疫学检测。该法兼有放射性核素的高灵敏度和抗原-抗体反应的特异性，检测灵敏度达pg水平。常用于标记的放射性核素为125I和131I，分为液相和固相两种方法。 该法常用于测定微量物质，如胰岛素、生长激素、甲状腺素、孕酮等激素，吗啡、地高辛、IgE等。 3．放射免疫测定法 (radioimmunoassay, RIA) ４．化学发光免疫分析 将发光物质（如吖啶酯、鲁米诺等）标记抗原或抗体，发光物质在反应剂（如过氧化阴离子）激发下发射光子，通过自动发光分析仪测定光子产量，可反映待检样品中抗体或抗原含量。 该法灵敏度高，常用于检测血清超微量活性物质（甲状腺素等激素）。 该法又称Western印迹法，其结合凝胶电泳与固相免疫技术，将借助电泳所区分的蛋白质转移至固相载体，再应用酶免疫、放射免疫等技术进行检测。 该法能对分子大小不同的蛋白质进行分离并确定其分子量，常用于检测多种病毒抗体或抗原。 ５．免疫印迹法(immunoblotting) 免疫印迹法 第三节　免疫细胞的检测 　　 一、 淋巴细胞及亚群的分离 外周血单个核细胞(PBMC)的分离：葡聚糖－泛影葡胺（即淋巴细胞分离液）密度梯度离心法 淋巴细胞亚群的分离 淋巴细胞为不均一的群体，可借助其表面标志及 功能差异而分为不同的群和亚群。 1．尼龙棉分离法 2．E花环分离法 3．洗淘法 　 4．流式细胞术(flow cytometry，FCM) 　 5．磁珠分离技术 E花环实验 磁珠分选 Removal of T cells from marrow graft Magnet Magnetic antibodies 二、免疫细胞功能的测定 1. T细胞功能测定： (1) 细胞增殖(转化)试验： 　 可分为非特异性丝裂原和特异性抗原两类。 * 丝裂原主要有PHA、Con A和PWM； * 抗原刺激物有破伤风类毒素、PPD和白色念珠菌等； 淋巴细胞增殖实验 (2) T细胞介导的细胞毒试验：CTL (1) B细胞增殖(转化)试验 (2) 溶血空斑形成试验 (3) 酶联免疫斑点法(ELISPOT): 2. B细胞功能判定 溶血空斑实验 试管凝集试验 间接凝集反应 间接凝集反应(indirect agglutination): 将可溶性抗原或抗体吸附于颗粒性载体表面，然后与相应的抗体或抗原反应，在电解质的作用下，出现肉眼可见的凝集现象. 载体 可溶性抗原 致敏 致敏颗粒 凝集颗粒 间接凝集试验示意图 间接凝集抑制试验（妊娠试验） 应用：可用于检测抗原或抗体（如早孕的检测），其 灵敏度高于一般间接凝集试验。 间接凝集抑制试验 免疫妊娠试验（1） 免疫妊娠试验（2） 各种凝集反应示意图 Ag-Ab反应的基本检测方法 （一）凝集反应 （二）沉淀反应 （三）补体参加的反应 （四）免疫标记技术 Definition:可溶性抗原（血清蛋白、外毒素、细菌滤液等）与相应抗体结合，在一定条件下，形成出现肉眼可见的沉淀物的现象称为沉淀反应。 该反应多用半固体琼脂凝胶作为介质进行琼脂扩散或免疫扩散，即可溶性抗原与抗体在凝胶中扩散，在比例合适处相遇即形成可见的白色沉淀。 （二）沉淀反应（Precipitation Tests） 1．单向免疫扩散(single immunodiffusion) 2．双向免疫扩散(double immunodiffusion) 3．免疫电泳(immunoelectrophoresis) 4．免疫比浊(immunonephelometry) （二）沉淀反应 单向免疫扩散(single immunodiffusion) 双向免疫扩散(double immunodiffusion) 单扩与双扩原理 　Ag-Ab反应的基本检测方法 （一）凝集反应 （二）沉淀反应 （三）补体参加的反应 （四）免疫标记技术 用荧光素、酶、放射性核素或化学发光物质等标记抗体或抗原，进行抗原-抗体反应的检测，是目前应用最为广泛的免疫学检测技术。标记物与抗体或抗原连接后并不改变抗原抗体的免疫特性，具有灵敏度高、快速、可定性、定量、定位等优点。 （四）免疫标记技术 （Immunolabelling technique） 此法乃用荧光素与抗体连接成荧光抗体，再与待检标本中抗原反应，置荧光显微