bmscs与alncsnha支架材料复合构建组织工程骨的体外实验研究word格式论文.docxVIP

优秀毕业论文 精品参考文献资料 目 录 中文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （1） 英文摘要‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （2） 1.前言‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （4） 2.骨髓间充质干细胞分离、培养、提纯、鉴定‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （7） 3. BMSCs 与 ALN/CS/nHA 复合支架材料共培养和体外诱导成骨实验‥‥‥（10） 3.1ALN/CS/nHA 与 BMSCs 的体外共培养实验‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （10） 3.2 细胞复合物体外诱导成骨实验‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （13） .讨论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （16） .结论‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （18） .全文总结‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （18） .论文创新点‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （19） .参考文献‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （19） 文献综述‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （23） 参考文献‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （34） 英文缩略词表‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （37） 攻读学位期间发表文章情况‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （38） 个人简历‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （39） 致 谢‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥‥ （40） 内蒙古医科大学硕士研究生学位论文（2015） 1 中 文 摘 要 【目的】 1、体外进行 rBMSCs（rat bone marrow stromal cells, 大鼠骨髓间充质干细胞） 的分离、培养、鉴定；2、rBMSCs 与 ALN/CS/nHA（新型阿伦磷酸钠-壳聚糖-纳米羟基 磷灰石支架材料）共培养并成骨诱导，研究用 ALN/CS/nHA 与种子细胞 BMSCs 复合构 建组织工程骨的可行性。 【方法】 1、体外进行分离、培养、鉴定 rBMSCs：贴壁培养法分离和培养 rBMSCs， 通过 FCM（Flow cytometry，流式细胞仪）鉴定 rBMSCs 表面抗??分子（CD73、CD90、 CD105、CD34、CD45）的表达率检测所得 rBMSCs 的纯度；2、rBMSCs 复合 ALN/CS/nHA 体外构建组织工程骨的实验研究：a、获取 p3 代 rBMSCs，与 ALN/CS/nHA 进行体外复 合培养，倒置显微镜下观察细胞生长情况，MTT 法进行测定 rBMSCs 的增殖能力、SEM （Scanning electron microscope，扫描电镜）下观察细胞在材料表面的黏附情况，总体评 估细胞与支架材料之间的相容性。b、rBMSCs 与 ALN/CS/nHA 体外成骨诱导，于第 3、 7、10 天检测细胞内 ALP 含量，第 3、6、9、12、15 天检测上清液中Ⅰ型胶原蛋白的含 量。对比分析新型材料有无促进 rBMSCs 成骨作用。 【结果】 1、贴壁培养法成功分离、培养 rBMSCs，经流式细胞仪检测，CD90，CD105， CD73 阳性率达到 95%，CD34、CD45 的阳性表达率在 5%以下；2、细胞生长特性：rBMSCs 与 ALN/CS/nHA 复合培养，随着培养时间的延长，三组细胞的数量逐步提高，最初 3d 实 验组、对照组和空白组细胞均处于生长潜伏期，第 3 天后各组细胞数量明显增加，第 6 天后各组细胞进入生长平台期，重复测量方差分析，显示组间无差别(P0.05)。SEM 结 果显示细胞在 ALN/CS/nHA 表面黏附良好；3、经成骨诱导后第 7、14 天的细胞材料复 合物均有 ALP(Alkaline phosphatas，碱性磷酸酶)、Ⅰ型胶原蛋白表达，实验组细胞 ALP 及Ⅰ型胶原蛋白表达量总体高于对照组及空白组。重复测量方差分析，显示组间有差别 (P0.05)。 【小结 】1、大鼠骨髓中可以分离、培养出体外培养条件下生长良好的且具有分化潜 能的 rBMSCs，第 3 代细胞在成骨诱导培养下可以向成骨细胞分化；2、rBMSCs 可与 ALN/CS/nHA 良好粘附并增殖，且保持正常细胞形态。ALN/CS/nHA 具有良好的细胞相 容 性 。 体 外 培 养时 ALN/CS/nHA 对 rBMSCs 的 增 殖 有促 进 作用 ； 3 、 rBMSCs 与 ALN/CS/nHA 共培养下诱导成骨，分泌出的 ALP，Ⅰ型胶原含量高于对照