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AMPK和SIRT-1参与定时高脂饮食对小鼠肝脏生物钟基因的影响研究中文摘要中文摘要目的：观察定时高脂饮食对高脂性脂肪肝小鼠肝脏生物钟基因及其脂质代谢相关基因表达的影响，并探讨其可能的机制。方法：选用雄性昆明种小鼠，严格控制明/暗条件（8:00-20:00/ 20:00-次日8:00），以晚上（19:00）定时给予高脂饮食6周复制高脂性脂肪肝小鼠模型，然后分别在不同授时时相（8:00、12:00、16:00、20:00、24:00和4:00）处置实验动物，用比色法测定肝组织中总胆固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯(triglycerides，TG)、游离脂肪酸(free fatty acids，FFA)和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide，NAD+)含量；用光镜检查肝组织的形态学变化；用ELISA法测定肝组织中AMP 依赖的蛋白激酶（AMP-activated protein kinase，AMPK）含量；用Real-time PCR法检测肝组织中生物钟基因Clock、Bmal1、Per1-2和Cry1-2，以及过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisomeproliferator-activated receptor，PPAR) α、过氧化物酶体增殖物激活受体γ 辅激活子-1(peroxisome proliferator-activated receptor gamma coactivator-1，PGC-1)α、脂蛋白脂酶（lipoproteinlipase，LPL）、二脂酰甘油酰基转移酶(diacylglycerol acyltransferase，DGAT)2、乙酰辅酶A 羧化酶-1(acetyl-CoA carboxylase-1，ACC-1) α、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(carnitine palmitoyltransferase-1，CPT-1)和烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase，NAMPT）mRNA表达的情况；用Western blot法测定肝组织中AMPK、p-AMPK、沉默信息调节因子-1(silentinformationregulatoroftranscription1，SIRT-1)、Cry2和Per2的蛋白表达情况。结果：在晚上定时给予高脂饮食6 周后，可见小鼠肝组织中有大量的脂质空泡形成，测得的肝组织中TC、TG和FFA含量在不同时间点均有不同程度的升高，而且与正常对照组相比，TC 含量的变化较平缓，但在光照期间有明显的幅度增加；TG 含量亦以光照期间升高幅度更为明显，于12:00 达到峰值；FFA含量则未见有明显的节律改变。Real-time PCR测定结果显示，脂质代谢相关基因PPARα、PGC-1α、LPL、DGAT2、ACC-1α和CPT-1 mRNA表达在节律和/或振幅上有明显改变，而肝脏生物I中文摘要AMPK和SIRT-1参与定时高脂饮食对小鼠肝脏生物钟基因的影响研究钟基因Clock、Bmal1、Per1-2 和Cry2 mRNA表达的量也有明显的改变。Western blot 测得Per2和Cry2 蛋白表达在振幅上也发生了明显的变化。进一步的研究发现，晚上定时给予高脂饮食6周后，小鼠肝组织中平均AMPK 和p-AMPK蛋白表达均降低。与正常对照组相比，高脂饮食组的AMPK峰值延迟了8 h，振幅在12:00 和20:00 有明显的统计学差异；而p-AMPK在这两个时间点，与正常对照组比较，则在12:00明显降低，在20:00显著增加。晚上定时高脂饮食也可以使肝组织中NAMPTmRNA、NAD+含量和SIRT-1蛋白表达在节律和/或振幅上发生明显的改变。结论：小鼠晚上定时高脂饮食会改变肝脏内部分生物钟基因的表达，以及一些脂质代谢相关基因的表达，从而导致肝脏脂质的增加，这可能部分与肝脏中能量感受器AMPK和SIRT-1节律改变介导的生物钟基因Cry2和Per2蛋白降解后使其对Clock/Bmal 1 的负反馈作用减弱有关。关键词：AMPK；SIRT-1；生物钟基因；高脂饮食作者：黄艳指导老师：谢梅林教授AMPK和SIRT-1参与定时高脂饮食对小鼠肝脏生物钟基因的影响研究英文摘要Involvement ofAMPKandSIRT-1in theinfluenceof timed high-fat dietin theevening on hepaticbiological clock gene expressionsin miceAbstractAim:Toinvestigatewhethertimedhigh-fatdietinthe