细胞工程-第二章：动物细胞培养 实验前准备yhy.pptVIP

细胞工程Cell Engineering 第二章 动物细胞培养 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。（分装前的细胞培养） 传代培养：将原代细胞从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 第一节： 动物细胞实验前准备 无菌、无毒的环境 培养液和所有培养用具进行无菌处理 措施：培养液中加抗生素，定期更换培养液 营养 糖、氨基酸、无机盐、微量元素、促生长因（维生素、激素等）和动物血清 温度和PH 36.5±0.5℃ 7.2-7.4 气体环境 O2 CO2 95％空气 5％的CO2 动物细胞室实验制度与规范1： ? 细胞培养室管理规定 1． 细胞培养室是进行各种细胞培养的净化级实验室，所有进入实验室的人员都必须遵守实验室有关的规章制度，按培养室管理规定操作。 2．实验人员进入该实验室进行实验工作时，必须更换、穿戴好工作服、鞋、帽、口罩。有关细胞培养的操作均在超净台上进行，严格按无菌程序操作。 3．实验人员在进行实验前必须熟悉实验内容、操作步骤及各类仪器的性能和操作方法，严格执行操作规程，并做好必要的安全防护。 4．害物品带入实验室；在细胞培养实验室内不得进行微生物等其它易污染物的培养。 5．严禁在实验室内吸烟和吃食物；与实验无关人员不得进入实验室。 动物细胞室实验制度与规范1： 6．实验室中的昂贵设备，未经许可，不得擅自开关。精密仪器必须经过专门培训方能上机操作，并严格遵守操作规程。 7．实验人员必须按规定的主要仪器参数进行操作，未经许可，不得随意更改有关仪器设备的技术参数，仪器设备出现故障或发生事故，应立即报告。 8．操作完成后，用1：1000的新洁尔敏溶液或75％酒精擦台面。出门前注意关闭酒精灯、照明灯，超净台。 9. 实验室的安全门是用来搬动大型仪器和处置紧急情况的通道，非紧急情况不得随意开启安全门；如发生火警、气体泄漏、漏电等紧急情况，室内人员应迅速通过安全门离开实验室。 10. 实验室开启、关闭程序： 动物细胞室实验制度与规范2： 细胞培养室的实验对象是离体组织和体外细胞，对致病微生物及病毒无抵抗性，有被污染的危险性。 一、进细胞培养室必须穿工作衣（白大衣），换拖鞋，不必需的物品勿携入室内。 二、使用前打开超净台风机、紫外线灯和风机，同时打开室内紫外线灯照射30分钟以上。 三、实验室内应保持安静和良好秩序，实验时要严肃认真。 四、实验室内严禁吸烟和饮食。 五、与操作无关的人员不得进入 细胞培养室 六、操作时严格按无菌操作程序进行。 七、如有害材料或试剂污染桌、凳、地面、书或衣物等，应报告管理人员，并及时洗净。 八、实验完毕，关闭超净台风机和电源，及时清理实验器材，最后用酒精棉球擦拭工作台面，并打开紫外灯照射30分钟。 九、做好细胞培养记录，以了解细胞生长情况，用于资料的分析和整理。 十、开实验室前，脱去工作衣和拖鞋。关好水、电、门、窗，方可离开实验室。 十一、无菌室内每周用乳酸蒸汽（或过氧乙酸，甲醛）加紫外线消毒1～2次，每隔两周彻底清理并消毒1次。 细胞试验开启程序：用洗手液清洁双手，将要带入实验室的物品必须经过高压灭菌，依次打开照明灯开关、风机开关、超净台、紫外灯开关，30分钟后，更换衣服、拖鞋后方可通过缓冲室进入培养室，关闭紫外灯开关。 实验结束关闭程序：实验结束后清洁和整理实验室，确认实验仪器设备处理无误，并将带出的废物，依次关闭超净台开关、风机开关和照明灯开关，人员通过缓冲室出实验室，随手关门；另不得随意关闭其它开关；锁闭实验室门。 四 细胞培养设施 　　1、实验室设计　　细胞培养是一种无菌操作技术，要求工作环境和条件必须保证无微生物污染和不受其它有害因素的影响。细胞培养室和设计原则是防止微生物污染和有害因素影响，要求工作环境清洁、空气清新，干燥和无烟尘。 细胞培养室的设计实施原则一般是无菌操作区设在室内较少走动的内侧，常规操作和封闭培养于一室，而洗刷消毒在另一室。 1．无菌操作区 （1）无菌操作室应划为三部分：更衣室、缓冲间、无菌操作间。无菌操作间专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；无菌操作间的空气消毒：紫外线灯产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利工作人员健康；要装备空气过滤功能恒温恒湿装置。 （2）净化工作台：操作简单，安装方便，占用空间小且净化效果很好。一般细胞培养室使用的净化工作台主要有两种：a)侧流式或称垂直式 b)外流式或称水平层流式。 2．孵育区 本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。 3．制备区 在该区主要进行培养液及有