流行性出血热及其防控关键技术-朱建波主任.pptVIP

样品编号 采样时间 动物编号 RT-PCR 病毒分离 120140 2012/07/24 1 P/S Y 120172 2012/08/14 3 P/S Y 120202 2012/09/03 3 P N 120288 2012/09/17 3 P / 120307 2012/10/24 3 P / 120289 2012/09/17 4 P / 120144 2012/07/24 6 N N 120309 2012/10/24 6 P / 120135 2012/07/18 9 N N 120145 2012/07/24 9 N N 120291 2012/09/17 9 P / 120148 2012/07/24 14 N N 120158 2012/08/01 14 P Y 120168 2012/08/07 14 P Y 120276 2012/10/10 14 P N 120312 2012/10/24 14 P/S / 120149 2012/07/24 15 N N 120159 2012/08/01 15 P Y 120169 2012/8/07 15 P Y 120277 2012/10/10 15 P / 120313 2012/10/24 15 P/S / 注：Y为分离到EHDV；N为分离到非EHDV毒株；/为未分离到毒株 抗凝血样品EHDV VP7 基因RT-PCR检测结果 EHDV VP7 RT-PCR鉴定病毒 对63份病毒分离物进行RT-PCR鉴定，阳性29份。对其中16份EHDV阳性样品进行测序分析，序列分析结果显示16份样品均为EHDV。 琼脂扩散免疫试验（AGID） 用所分离的云南EHDV大量繁殖扩增，浓缩纯化制备琼扩抗原，免疫兔子和绵羊制备了阳性血清，建立了AGID方法。所制备的抗原与阳性血清、阳性牛血清能形成清晰的沉淀线。 微量血清中和试验（SNT） 参照BTV微量血清中和试验技术方案，建立了相应的EHDV微量血清中和试验方法。 毒株分型 对2012年师宗样品中所分离的16株EHDV毒株的VP7基因进行序列分析，结果显示，这16个毒株分属2个基因型。 来自1、2、3、6和14号牛的毒株同属一个基因群， 来自12和15号牛的毒株属另一个基因群。 Nucleotide Substitutions (x100) 0 34.4 5 10 15 20 25 30 120182(P6)-I34-EHDV-S7-1F.seq 120168(D,P2)-I11-EHDV-S7-1F.seq 120172-EH-VP7c.seq 120204(D,P4)-I54-EHDV-S7-1F.seq 120192(D,P3)-I51-EHDV-S7-1F.seq 120168(P4)-I20-EHDV-S7-1F.seq 120161(P3)-I18-EHDV-S7-1F.seq 120152(P13)-I39-EHDV-S7-1F.seq 120181(L,P3)-I50-EHDV-S7-1F.seq AM745043.1-EHDV6-VP7-Australia.seq 120130(P4)-I65-EHDV-S7-1F.seq 120166(P5)-I19-EHDV-S7-1F.seq 120176(L,P2)-I12-EHDV-S7-1F.seq 120169(P5)-I21-EHDV-S7-1F.seq 120199(L,P3)-I53-EHDV-S7-1F.seq AM745063.1-EHDV8-VP7-Australia.seq AM744983.1-EHDV1-VP7-USA New Jersey.seq AM745033.1-EHDV5-VP7-Australia.seq AB041934.1-EHDV2-VP7-Ibarakivirus, Japa AM745053.1-EHDV7-VP7-Australia.seq AM745023.1-EHDV4-VP7-Nigeria.seq Group 1 Group 2 根据EHDV VP7基因序列构建系统发育树 云南师宗毒株 Nucleotide Substitutions (x100) 0 48.7 5 10 15 20 25 30 35 40 45 120161(I18)-6A2R.seq 120162(I39)-6A2R.seq 120168(D I11)-6A2R.seq A