第三章 细胞生物学研究方法(定稿).pptVIP

第三章 细胞生物学研究方法 细胞生物学研究方法 第三章 细胞生物学研究方法 第一节 细胞形态结构的观察方法 第二节 细胞组分的分析方法 第三节 细胞培养、细胞工程与显微操作技术 第一节 细胞形态结构的观察方法 1 光学显微镜技术（light microscopy） 2 电子显微镜技术 (Electro microscopy) 3 扫描遂道显微镜 (scanning tunneling microscope ) 一、光学显微镜技术（light microscopy) ?普通复式光学显微镜技术 ?荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?相差显微镜（phase-contrast microscope） 普通复式光学显微镜技术 分辨率是指区分开两个质点间的最小距离 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） Fluorescent Microscope 荧光显微镜技术（Fluorescence Microscopy） ?应用 ?直接荧光标记技术 ?间接荧光标记技术(免疫荧光标记技术) ?在光镜水平用于特异蛋白质 等生物大分子的定性定位： 如绿色荧光蛋白(GFP)的应用 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?原理： 激光共焦扫描显微镜技术（Laser Scanning Confocal Microscopy） ?原理： ?应用： 排除焦平面以外光的干扰，增强 图像反差和提高分辨率(1.4—1.7倍)， 通过“光切片”观察样品内部结构，可 重构样品的三维结构。 ?相差显微镜（phase-contrast microscope） 将光程差或相位差转换成振幅差，可用于观察活细胞 ?微分干涉显微镜（differential-interference microscope） 偏振光经合成后，使样品中厚度上的微小区别转化成 明暗区别，增加了样品反差且具有立体感。适于研究 活细胞中较大的细胞器 ?录像增差显微镜技术（video-enhance microscopy） 计算机辅助的DIC显微镜可在高分辨率下研究活 细胞中的颗粒及细胞器的运动 二、 电子显微镜技术 电子显微镜的基本知识 ?电镜与光镜的比较 ?电镜与光镜光路图比较 ?电子显微镜的基本构造 电镜与光镜的比较 电镜与光镜光路图比较 电子显微镜的基本构造 二、 电子显微镜技术 电子显微镜的基本知识 ?电镜与光镜的比较 ?电镜与光镜光路图比较 ?电子显微镜的基本构造 主要电镜制样技术 ?负染色技术 ?冰冻蚀刻技术 ?超薄切片技术 ?电镜三维重构技术 主要电镜制样技术 超薄切片技术 用于电镜观察的样本制备示意图 细胞超微结构 ? 负染色技术（Negative staining） 染色背景，衬托出样品的精细结构，如病毒、核糖体等结构。 ? 冷冻蚀刻技术（Freeze etching） 冰冻断裂与蚀刻复型：主要用来观察膜断裂面的蛋白质颗粒 和膜表面结构。 ? 电镜三维重构技术 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学（Structural Biology） 主要研究生物大分子空间结构及其相互关系的主要实验手段。 二、 电子显微镜技术 电子显微镜的基本知识 ?电镜与光镜的比较 ?电镜与光镜光路图比较 ?电子显微镜的基本构造