丙型肝炎实验诊断.pptVIP

丙型肝炎实验诊断研究进展山东省临床检验中心卢志明 1、有包膜,属黄病毒科，丙型肝炎属。 2、单股正链 RNA (9.6 kb) 3、T?: ?2.7 小时 4、每日复制量：10 兆 (1012) 病毒颗粒 从非甲非乙型肝炎到丙型肝炎: HCV基因组结构 HCV为单股正链RNA病毒 5`NC区、3`NC区为非编码区 5`NC与3`NC间分结构编码区：C区、E1、E2；非结构编码区：NS1~5 5`NC区最保守，C区较保守，E2／NS1有高变区（HVR1） 表 HCV表达蛋白的特性和功能 全球丙肝的流行情况 1、WHO的资料表明,全世界已有约1.7亿丙型肝炎病毒感染者。 2、急性HCV感染者中8O-90％可发展为慢性肝炎,其中约20-30％会缓慢进展为肝硬化。1-5％发展为肝癌。 3、HCV主要经血液和血液制品传播。 至今还没有预防丙型肝炎的疫苗问世,治疗效果不是十分理想。因此,建立一种针对HCV的具有高灵敏度、特异性和稳定性的检测方法，对于防止HCV传播、HCV感染的早期诊断和治疗具有重要意义。 丙肝病毒感染全球流行概况 我国HCV基因型调查 1、HCV 1b型是主要的基因型，其检出率达83.17％。 2、HCV 2型检出率低，占6.86％；其余为1b、2、4b型的混合型。 3、HCV 1b检出率在30岁、30～49岁、50岁组分别为77.77％、83.92％、90.90％。 4、HCV 1b在女性感染的比率较高（93.61％），男性为75％，差异有极显著的统计意义(p0.01)。 5、HCV 1b型在感染时间10年和10年病人中的检出率分别为100％和80.43％（p0.01） 。 HCV的感染人数 = 临床病例？ 发病隐匿 基层临床医生认识不足 丙肝检测没有纳入常规查体项目 确诊比较难，费用高 抗体的窗口期，RNA的假阴性** ——临床诊断病例少 我 们 如 何 应 对 挑 战？ 1、制定中国丙肝防治指南：规范丙肝的筛查， 诊断和治疗。 2、加强丙肝疾病和诊疗对基层医生的教育。 3、重视临床一线对丙肝的筛查。 4、通过各种途径提高公众对丙肝的防范意识： 如媒体等。 近年来丙肝研究进展 丙肝分型、病毒复制、病毒变异等 慢性化机制、脂肪变性、癌变机理等 抗病毒治疗：I型应答率40%；II型应答率80% 特异性靶向抗病毒治疗（2期临床） 实验室诊断进展 多抗原包被的抗体检测（第3代抗-HCV） HCV-Ag的检测（第4代） 抗原-抗体联合检测（筛查） HCV的基因分型 HCV-RNA的检测 ——总之，实验室诊断研究进展？ 实验室诊断方法  常用的检测方法 酶联免疫吸附试验-HCV抗体检测 酶联免疫吸附试验- HCV核心抗原检测 免疫学方法-免疫印迹法（RIBA） 免疫学方法-血清学分型 分子生物学方法-HCV-PCR定量、HCV-PCR定性 分子生物学基因分型方法-型特异PCR分型法、型特异探针杂交法、限制性长度多态性分析法(RFIJP)、核酸序列分析法、酶切分型法、基因芯片等 感染丙肝病毒后各指标检测时间表 感染丙肝病毒后各指标检测时间表 HCV抗体检测应用的不足 目前国内主要应用抗HCV/EIA检测抗体，经抗体筛选后，临床上仍有少量的输血后丙肝的发生。 丙肝抗体假阴性问题 1.窗口期 2.静默感染 (immunosilent infection) 3.试剂质量 4.其它 HCV抗体检测应用的不足 1、不能用于丙型肝炎的早期诊断。 2、临床上不能区分既往感染和现症感染。 3、抗病毒治疗不一定造成抗HCV阴转，不能用于抗病毒疗效的检测。 血清HCV-RNA的检测 血清HCV-RNA的定性检测： 容易产生假阳性或假阴性（PCR产物易产生污染） 血清HCV-RNA的定量检测： 缺点：RNA降解容易出现假阴性 优点：可用于抗病毒治疗的选择与疗效监测 免疫学方法-免疫印迹法 重组免疫印迹法(Recornbinant immunobIot， RIBA)RIBA是FDA批准的抗HCV补充试验．主要是 解决ELISA试验中的假阳性问题。 目前广泛使用的RIBA一3非特异性反应明显减少， 敏感度显著提高(99．5）。 缺点是RIBA在操作上较ELISA困难，费时、成本 高，因此限制了这项技术在临床上的普遍使用。 目前检测方法 抗-HCV and HCV-RNA的检测 ——不能满足临床早期、准确、可靠的要求。 RIBA实验操作复杂、费用较高、推广难 丙肝抗原检测 1、丙型肝炎早期感染诊断指标