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生物分离工程精品课程 主讲：赵延斌 沉淀法 生物分离过程的一般流程 概述 16.1 概述 概述 概述 概述 概述 概述 概述 概述 沉淀法的分类 概述 16.2 蛋白质的溶解特性 蛋白质的溶解特性 蛋白质的溶解特性 蛋白质的溶解特性 蛋白质分子表面的憎水区域和荷电区域 蛋白质的溶解特性 防止蛋白质凝聚沉淀的屏障 蛋白质的溶解特性 16.3 蛋白质胶体溶液的稳定性 蛋白质交替溶液的稳定性 蛋白质/胶体颗粒的凝聚和絮凝现象相似 蛋白质交替溶液的稳定性 沉淀法 蛋白质交替溶液的稳定性 沉淀法 蛋白质交替溶液的稳定性 吸引力 蛋白质交替溶液的稳定性 蛋白质交替溶液的稳定性 DLVO理论 蛋白质交替溶液的稳定性 蛋白质盐析 中性盐盐析法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 Cohn方程式 蛋白质盐析 Cohnx 经验式（用浓度代替离子强度） 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 用盐析法分离蛋白质的二种方法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 蛋白质盐析 盐析操作(加盐方式） 蛋白质盐析 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 阴阳离子盐析效果 蛋白质盐析 pH值和温度的影响 蛋白质盐析 β值随pH值变化 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 沉淀法 蛋白质盐析 等电点沉淀法 等电点沉淀法 等电点沉淀法 沉淀法 等电点沉淀法 等电点沉淀法 等电点沉淀法 16.6 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 有机溶剂沉淀法 沉淀法 有机溶剂沉淀法 16.7非离子型聚合物 非离子型聚合物 非离子型聚合物 非离子型聚合物 16.8 聚电解质沉淀 聚电解质沉淀 16.9 金属离子沉淀 金属离子沉淀 机理 金属离子沉淀 金属离子沉淀蛋白质 金属离子沉淀 16.10 沉淀生成动力学 沉淀生成动力学 沉淀过程 沉淀生成动力学 16.11 亲和沉淀 亲和沉淀 亲 和 沉 淀 亲和沉淀 Zn 离子沉淀尿激酶 亲和沉淀 EDTA 溶出效应 亲和沉淀 硫酸铵替代EDTA 亲和沉淀 亲和沉淀 沉淀法 亲和沉淀 利用蛋白质沉淀大规模提纯白蛋白与免疫球蛋白的工艺 亲和沉淀 思考题： 亲和沉淀 沉淀法 第二讲 沉淀法的分类 第二讲 16.9 金属离子沉淀 第二讲 机 理 第二讲 金属离子沉淀蛋白质 第二讲 选择性变性沉淀法 第二讲 选择性变性沉淀法 第二讲 选择性溶剂沉淀法 第二讲 选择性溶剂沉淀法 第二讲 选择性变性沉淀法 第二讲 16.10 沉淀生成动力学 第二讲 沉淀过程 第二讲 16.11 亲和沉淀 第二讲 亲 和 沉 淀 第二讲 Zn 离子沉淀尿激酶 第二讲 EDTA 溶出效应 第二讲 第二讲 硫酸铵溶解尿激酶锌络合物 第二讲 沉淀法 第二讲 沉淀法应用 第二讲 利用蛋白质沉淀大规模提纯白蛋白与免疫球蛋白的工艺 第二讲 柠檬酸的生产 第二讲 沉淀法 第二讲 新工艺的主要种类 第二讲 萃取 一沉淀法提取分离茶多酚 第二讲 儿茶素类化合物是茶多酚的主要成分，其结构式可表示为 ： 第二讲 茶多酚 第二讲 茶 多 酚 第二讲 沉淀法的一般工艺路线 第二讲 沉淀法 第二讲 萃取法和沉淀法提取茶多酚工艺图 第二讲 沉淀法 第二讲 思考题： 第二讲 生物分离工程精品课程 沉淀法 硫酸铵溶解尿激酶锌络合物 沉淀法 硫酸铵的选用 1)它在低浓度时可能有盐溶作用，促进沉淀蛋 白溶解； 2)因为本身有NH4+，与Zn 2+有络合作用，有 利于沉淀物溶解； 3)硫酸铵为盐析所用，在最终盐析中，只需补 加规定量即可，而不引入其他成分。 沉淀法 沉淀法 1 .理解概念：硫酸铵饱和度，盐溶， 盐析 2 .沉淀与结晶有何不同？ 3 .有机溶剂沉淀蛋白质的机理什么？用乙醇 沉淀蛋白质时应注意哪些事项？ 第二讲 沉淀法 根据所加入的沉淀剂的不同，沉淀法可以分为： （1）盐析法； （2）等电点沉淀法； （3）有机溶剂沉淀法； （4）非离子型聚合物沉淀法； （5）聚电解质沉淀法； （6）高价金属离子沉淀法等。 沉淀法 金属离子在蛋白质分级沉淀上的应用可以追溯到1905年，当时已观察到了金属离子对蛋白质溶解度的影响，但是，真正的认识是后来从金属离子与纯血浆蛋白的特异相互作用的研究中得到的。实验利用低浓度的锌和钡与冷乙醇的浓度或用量来提高血浆分级分离的质量和选择性，并使溶剂分离蛋白质的操作更易控制，最后发展为用锌或其它金属离子完全取代乙醇。 沉淀法 金属离子的沉淀作用是由于它们能与蛋白质分子中的特殊部位起反应造成的。例如锌易与組胺酸残基中咪唑基结合，