17-18版：5.3 血红蛋白的提取和分离（步步高）.pptx

专题5　DNA和蛋白质技术第15课时　血红蛋白的提取和分离学习导航　1.通过阅读教材P64“基础知识”，掌握蛋白质分离的方法凝胶色谱法的 原理、缓冲液的制备及作用和蛋白质纯度鉴定的方法电泳法的原理。2.分析教材P66“实验操作”，掌握蛋白质提取和分离的过程。3.阅读教材P69“操作提示”，掌握蛋白质分离过程中需注意的问题。重难点击　1.尝试提取和分离血液中的血红蛋白，体验提取生物大分子的基本过程 和方法。2.了解凝胶色谱法、电泳法等分离生物大分子方法的基本原理。内容索引一、蛋白质的分离技术二、实验操作和操作提示当堂检测一、蛋白质的分离技术1.蛋白质的分离依据根据蛋白质各种特性的差异，如分子的形状和 、所带 的性质和多少、溶解度、 和对其他分子的亲和力等，可以用来分离不同种类的蛋白质。2.凝胶色谱法(1)概念：也称做 ，是根据 分离蛋白质的有效方法。大小电荷吸附性质分配色谱法相对分子质量的大小基础梳理多孔球体(2)凝胶的特点(3)常用凝胶： 或琼脂糖。(4)分离原理①相对分子质量较小的蛋白质容易进入凝胶内部的通道，路程 ，移动速度 ，通过凝胶的时间 。②相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶内部的通道，只能在凝胶_____移动，路程 ，移动速度 ，通过凝胶的时间 。多糖类化合物贯穿的通道葡萄糖较长较慢较长外部较短较快较短形态：微小的_________组成：大多数由 构成结构：内部有许多___________3.缓冲溶液(1)作用：在一定范围内，缓冲溶液能够抵制 对溶液pH的影响，维持pH基本不变。(2)配制：通常由1～2种缓冲剂溶解于水中配制而成。调节缓冲剂的_____ 就可以制得 的缓冲液。(3)意义：为了能够在实验室条件下准确模拟生物体内的过程，保持_____ 与体内环境中的pH基本一致。外界的酸和碱使用在不同pH范围内使用比例体外溶液的pH4.电泳(1)概念：带电粒子在 的作用下发生 的过程。(2)原理①带电粒子：许多重要的生物大分子，如多肽、核酸等都具有 的基团，在一定的pH下，这些基团会带上 。②迁移动力与方向：在电场的作用下，带电分子会向着与其_____________的电极移动。③分离依据：电泳利用了待分离样品中各种分子 以及分子本身的 、 的不同，使带电分子产生 ，从而实现样品中各种分子的分离。(3)常用的电泳方法： 电泳和 电泳。电场迁移可解离正电或负电所带电荷相反带电性质的差异大小形状不同的迁移速度聚丙烯酰胺凝胶琼脂糖凝胶1.凝胶色谱法(1)结合右图，根据凝胶色谱法的分离原理，填表分析不同大小的分子洗脱后的次序。?相对分子质量大相对分子质量小直径大小__________运动方式_____________无规则的扩散运动运动路程较短_____运动速度_____较慢洗脱次序先流出后流出较大较小垂直向下运动较长较快问题探究(2)结合右图，分析为什么相对分子质量较大的蛋白质会先从色谱柱中洗脱出来？答案　相对分子质量较小的蛋白质由于扩散作用进入凝胶颗粒内部，而被滞留；相对分子质量较大的蛋白质被排阻在凝胶颗粒外面，在颗粒之间迅速通过。(3)凝胶色谱法分离蛋白质时通过一次洗脱能否将所需蛋白质与其他杂质彻底分离？答案　不能。相对分子质量较大的蛋白质无法进入凝胶颗粒内部，移动距离较近，移动速度较快，先洗脱出来；但相对分子质量较小的蛋白质可能进入凝胶颗粒内部，也可能不进入，导致部分相对分子质量较小的蛋白质可能与相对分子质量较大的蛋白质一起洗脱出来。答案2.电泳(1)从电荷方面思考，适合电泳法分离的各种分子需具备什么条件？答案　各种分子应带有不同种类和不同量的电荷。(2)SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白质是否依据蛋白质所带电荷的差异？为什么？答案　否。因为SDS能与蛋白质结合，形成蛋白质－SDS复合物，SDS它所带负电荷的量远大于蛋白质分子原有的电荷量，因而掩盖了不同蛋白质间的电荷差异，使电泳迁移率完全由蛋白质分子的大小决定。答案归纳总结　琼脂糖凝胶电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳的两点区别(1)分离原理不同①琼脂糖凝胶电泳依据分子所带电荷的差异和分子大小、形状等。②SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳则完全取决于分子大小，而非电荷性质和分子形状。(2)用途不同①琼脂糖凝胶电泳广泛应用于核酸的研究中，用于分离大分子核酸。②SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳则广泛应用于分离蛋白质和相对分子质量较小的核酸。1.凝胶色谱法分离蛋白质时由色谱柱下端最先流出的是A.相对分子质量较小的蛋白质B.相对分子质量较大的蛋白质C.凝胶颗粒D.葡萄糖或琼脂糖分子解析　凝胶色谱法分离蛋白质的原理是依据蛋白质分子相对分子质量的大小，相对分子质量大的分子不能进入凝胶内部的通道，路程较短，移动速度快，先洗脱出来；相对分子质量小的分子能够进入凝胶内部的通道，路程较长，移动速度