艾滋病及HIV的检测相关培训.ppt

艾滋病及HIV的检测;一、HIV的基本生物学特性;HIV 的 分 群和亚型;HIV病毒体呈球形，直径约100~120nm。 电镜下成熟的HIV-1呈现一致密的圆柱状核心和一个病毒包膜。 病毒核心由病毒RNA、核心结构蛋白和病毒复制所必须的酶类组成。 HIV的RNA为两条相同拷贝（完全同源）的正股RNA链。 ;HIV对环境中物理因素和化学因素抵抗力均较弱，比HBV的抵抗力低得多。 对HBV有效的消毒和灭活方法均适用于HIV。 HIV对热很敏感，对低温耐受性强于高温。因此，可以用高温灭活病毒，在低温条件下保存病毒。 在室温（22~27℃）液体环境下HIV可存活15天以上；经56℃处理30min可使HIV在体外对人的T淋巴细胞失去感染性，但不能完全灭活血清中的HIV；经过60℃ 3小时或80℃ 30min作用后不能检出感染性病毒。;HIV耐碱不耐酸 HIV对化学因素很敏感 室温中0.5%次氯酸钠或75%酒精只需1min即不能检出RT酶活性； 0.2%次氯酸钠、0.1%家用漂白粉、0.1%戊二醛等5min即可灭活HIV； 30%酒精溶液5min、20%酒精溶液10min可灭活HIV。 对紫外线不敏感，离开人体可存活数小时至数天。;二、艾滋病的传播途径 ;三、HIV感染在体内的动态分期;通常4-12周发生HIV抗体阳转。从HIV感染到产生抗体（或血请抗体阳转）称为“窗口期”，95%的HIV感染都发生在感染后的 5.8 个月内，故一般认为窗口期为3个月；高度怀疑者可追踪至6个月。 “ HIV感染早期”定义：血清抗体阳转和HIV感染6个月之间的阶段。6个月时病毒载量达到一个“固定值”，早期抗病毒治疗可降至很低，如果不进行抗病毒治疗，几年内不会有很大变化。此固定值和预后有很大关系。 早期治疗的目标之一是重新设定固定值，使固定值保持较低水平。;病人无临床症状，体检时无异常，少数可查到“持续性全身性淋巴腺病”（PGL），肿大的淋巴结至少发生在两处,且不是腹股沟淋巴结。 细胞内的病毒大部分处于潜伏状态，所以淋巴结中病毒浓度很高。 淋巴组织是病毒的主要藏身处，外周血中的病毒载量相对不高。;3、艾滋病前期（“ARC”或“B期”） 艾滋病前期症状包括被HIV感染后更常见更严重的症状（包括鹅口疮、口腔毛状黏膜白斑病、发热、体重减轻等），但还不是艾滋病的典型症状。4、艾滋病期 当患者出现典型症状时，CD4+细胞计数通常降至200/ul以下，血和淋巴结中的HIV又上升到相当高的水平，同时抗病毒CD8+细胞反应减弱。在艾滋病期病人血液中的HIV群体又一次变得相当均一，通常是细胞融合（S1）表型为主，与T细胞嗜性有关。;四、HIV感染的三种临床结局和长期存活 的相关因素： 1.典型进展者 在感染早期，其免疫功能未受损害，但在8~10年内免疫控制能力逐渐下降，最后发展成艾滋病。 2.快速进展者 病程快速进展，CD4+细胞计数在2-5年内迅速下降,抗HIV的抗体水平很低，而且该抗体中和HIV的能力也较差。 快速进展者最显著的特征：HIV感染后一直维持较高的病毒载量，而且分离的HIV有均一性。;3.长期存活者（又称长期不进展者） 这些感染者能维持健康状态12年以上，并且CD4+细胞计数维持正常。 长期存活者在感染者中的比例一般在8~10%，目前最长已达20多年。 ;3、尿液HIV抗体检测;样品 ;1、免疫印迹式验（WB）： WB是将HIV病毒蛋白用SDS电泳，把分子量大小不等的蛋白带分离开来，然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条装，每一条硝酸纤维膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。 待检血清样品1：100稀释，加到放置硝酸纤维膜的槽内，恒温震荡，充分接触反应。血清中抗-HIV抗体，与膜条上的抗原带相结合。加入抗人-IgG酶结合物和底物后，即可使抗原-抗体结合带呈现紫褐色。根据出现条带情况判定结果。; 表3 不同国际组织HIV抗体免疫印迹（WB）试验阳性结果判断标准;我国判定标准： （1）HIV-1抗体阳性（+） 有下列任何一项者，即可确认： ①至少有二条env带（gp41和gp160或gp120）出现，gp41和gp160，或gp41和gp120，或gp41和gp160/gp120。 ②至少有一条env带和p24带同时出现。 （2）HIV-2抗体血清学阳性反应（+） 符合WHO标准（有二条env带，有或无gag带），符合试剂盒标准，方可判为血清学阳性反应。 （3）HIV抗体阴性（-） 无HIV抗体特异带出现，或仅有p17。 （4）HIV抗体不确定（±）：出现HIV特异性抗体带，但带型不足以确认阳性者。 ;2、免疫荧光试验（IFA） 将HIV感