肿瘤的基因治疗 - 北京大学医学图书馆.ppt

RNA肿瘤病毒与病毒癌基因 肿瘤病毒 RNA肿瘤病毒的分类 根据感染宿主后肿瘤发生快慢分类： 1、急性转化病毒 Rouse Sarcoma Virus 潜伏期短（数周）、可以使培养的细胞癌变。 2、慢性转化病毒 Avian Leukosis Virus 潜伏期长、不能使培养细胞发生癌变。 RNA肿瘤病毒是通过激活细胞 的原癌基因来起作用的。 逆转录病毒与细胞癌基因活化 RNA病毒 原癌基因结构异常 癌变 癌基因的分类与功能 按功能分： 1、生长因子家族 v-Sis 2、跨膜酪氨酸激酶 v-Ros 3、膜相关酪氨酸激酶 v-Src 4、丝氨酸-苏氨酸激酶 v-Raf 5、RAS家族 v-H-Ras, v-K-Ras 6、核蛋白-v-Myc, v-Fos 按细胞内定位和生物学功能分类： 1、生长因子, Int-2 2、生长因子受体, EGFR 3、信号传导分子, Fas 4、转录因子 Myc 5、细胞凋亡基因 Bcl-2 6、细胞周期蛋白 CDK4 肿瘤DNA转化与癌基因的鉴定 癌基因变异方式和活化 点突变与癌基因 基因点突变是癌基因活化的主要方式。如： H-ras第12位密码子GGC 变为 GTC,编码的氨基酸由甘氨酸变为颉氨酸，这样其产物p21-Ras蛋白的结构发生变化而导致基因的活化。 DNA扩增与癌基因 细胞内一些基因通过不明原因的复制成多拷贝，这些DNA以游离的形式存在称双微体（DMS）或再次整合入染色体形成均染区（HSR），它一般表示染色体结构破坏和不稳定性。基因拷贝数增多往往导致基因表达增多。因此，可以认为基因扩增和过量表达均可影响细胞正常生理功能。 癌基因甲基化的改变 DNA甲基化状态的改变可导致基因结构和功能的改变，是细胞癌变过程中重要的一步。 通常发生在CpG双核苷区 某些癌基因低甲基化和抑癌基因高甲基化是细胞癌变的一个重要特征。 甲基化水平与肿瘤生物学特性密切相关，DNA甲基化水平愈低肿瘤的浸润能力就越高，临床分期也愈晚。 染色体重排与癌基因 最初研究发现在淋巴瘤和淋巴细胞白血病中存在免疫球蛋白或T细胞受体基因与未知染色体基因易位。导致一些未知基因易位到免疫球蛋白或T细胞受体。这种排列方式可以导致只在神经组织或胚胎细胞中表达的基因在有可能在B细胞或T细胞中表达，这种表达可导致细胞的增殖和分化异常。 癌基因与人类肿瘤 Ras基因变异与肿瘤 分型：N-ras、H-ras、K-ras 都编码鸟苷酸结合蛋白，分子量21000（通常命名为p21）。 肿瘤中，以K-Ras 为主， H-Ras, N-Ras较少见。 Ras蛋白在细胞增殖分化信号从激活的跨膜受体传递到下游蛋白激酶过程中起重要作用。 突变的ras降低了ras蛋白水解GTP为GDP的能力。突变的ras降低了自身内源的GTPase的活性，更重要的是降低了它们与GTPase活化蛋白的结合能力。导致ras与GTP持续结合具有促进细胞增长的作用。 Bcl-2基因与细胞程序化死亡 B细胞肿瘤中鉴定出来的癌基因，由染色体[t(14;18) (q32;q21)]异位激活。 分布部位：核膜、部分内质网及线粒体外膜。 分子量：25KD Bcl-2基因持续表达可以延长IL-3依赖性的淋巴细胞在无IL-3培养基中的存活时间。 细胞周期蛋白 细胞周期受到一系列因子的调控，其中作主要的是一组cyclin蛋白，它们与细胞周期素依赖性激酶（cyclin-dependent kinase,CDKs）相结合而对细胞周期发挥调节作用。其中，最重要的是G1晚期的R点，通过此点的细胞将不可逆的进入分裂周期。当细胞受到刺激急如周期后最早表达的是cyclin D，它通常与CDK4结合，在有些细胞中与CDK6结合使细胞通过R点。 Cyclin D/CDK4复合物中cyclin D能够通过其N端LXCXE序列与Rb结合，在CDK4的作用下，使Rb蛋白磷酸化，使Rb释放出转录因子E2F后者激活一系列的基因，促使细胞进入S期。抗cyclin D的抗体可以使大多数细胞停留在S期前，但cyclin/CDK复合物的这种作用必须有Rb的存在。 Cyclin D的半衰期很短大约30分钟，其表达易受外界因素的影响，在生长因子刺激的细胞增殖中，加入生长因子可导致cyclin D1和CDK4在G1期的表达，从反应体系中撤出生长因子会导致cyclin D1的快速降解，并阻止G1期细胞进入S期。因此，人们推测cyclin D上调导致细胞不在依赖生长因子而与肿瘤发生有密切关系。 现已经证明cyclin D1和cyclin D2的变异可起癌基因的作用。 Myc基因 基因也有三种：C-Myc, N-Myc, L-Myc Myc 家族主要在细胞生