原理1953年美国的WHCoulter发明了用电阻抗原理测量液体中颗粒的体积.DOC

原理1953年美国的W.H.Coulter发明了用电阻抗原理测量液体中颗粒的体积和数量的方法[1]，马上就应用于人体外周血液中血细胞的计数和体积测量。七十年代起集成电子学和计算机的发展，全世界很多公司生产的血细胞分析仪Hematology Analyzer(五、六十年代称为血球计数仪Blood cell counter)，广泛应用于医院中原来基于显微镜目测计数的血常规检验[2]。60年代未血细胞分析仪除可进行血细胞计数外，还可以同时测定HGB血红蛋白。70年代，血小板计数仪问世。80年代中期，出现了白细胞分类(3分类) 分析仪。此后流式细胞术、激光散射、免疫荧光、多角度偏振散射、射频、细胞化学等原理应用于血细胞分析仪中，对细胞的内部结构(核和颗粒)进行测量和分析。90年代，开发出对网状红细胞进行计数的血细胞分析仪，同时有核红细胞、5分类和幼稚细胞的检测更成熟，并发展成为血细胞分析流水线[3]。HA-618自动血细胞分析仪基于下述原理测量血细胞的参数和体积分布：?????????? 红细胞和白细胞计数???? 电阻抗法原理 细胞压积和细胞分布参数? 细胞脉冲高度的测量和体积分布的计算 白细胞分类计数?? 溶血剂作用后白细胞体积的分类拟合计算 血红蛋白浓度??? 血红蛋白衍生物的比色分析 血小板计数????? 体积分布的拟合计算 电阻抗原理由于血细胞的非传导性质，电解质溶液中悬浮的血细胞在通过检测小孔时会引起小孔的电阻变化，这种进行血细胞计数和体积测量的方法称为电阻抗法或库尔特原理。 图1-1?????(a)??? ???? ?? (b) 　图1-1(a)为应用库尔特原理检测细胞的简单装置示意图。当容器1中的一个细胞通过检测小孔进入容器2时，会在检测电路中产生一个脉冲信号(图1-1(b))，信号大小与细胞体积成正比。分析仪将血液和电解质溶液（稀释液）配成固定稀释倍数的稀释样品。一定量的稀释样品通过检测小孔时，记录脉冲的个数，可以测量细胞的数目，计算血液的细胞计数（浓度）；分析脉冲的大小，可以测量细胞的体积和体积分布图，计算血液细胞的形态学参数。 白细胞分类计数在样品中加入溶血剂，红细胞被溶解。白细胞在受控溶血的条件下发生一定程度的脱水，此时白细胞的体积取决于胞内有形物质的多少[4]。白细胞内小细胞，如淋巴细胞为单个核，核小，颗粒少，大小为35～98fL；白细胞内大细胞，如中性粒细胞为分叶核，颗粒多，大小为160～450fL；而单核细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、原始细胞、中晚幼粒细胞则收缩为98～160fL，被称为白细胞内中细胞，或称中值细胞。图1-2为白细胞的体积分布图，或称直方图。对直方图的不同区域分类拟合和积分计算，可得到白细胞的三分类计数（LYM#，MON#，GAN#）。 ?????????? ?????????????? 图1-2 血小板的拟合曲线血小板计数时，容易受到样品处理不当产生的大量气泡、小红细胞、其它细胞或碎片、血液样品中的杂质以及电子噪声的干扰，从而导致血小板计数的增高和MPV的不稳定。分析仪对获得的PLT直方图采用拟合计算[5]，得到一个排除干扰后可靠而稳定的血小板拟合曲线，根据该曲线计算PLT、MPV、HCT、PDW，见图1-3。 ???????????? 图1-3???????????????????? 比色分析在样品中加入溶血剂，红细胞膜被溶解。其中的血红蛋白经溶血剂的作用转化成颜色稳定的血红蛋白衍生物，这种物质的光密度曲线在540nm附近有个吸收峰。检测样品的透射光强度I，按照Lamber_Beer定律，可计算样品中血红蛋白浓度HGB。 其中K为与吸光系数、透射光径、稀释、校准有关的系数，I0为空白样品的透射光强度。 为了提高测量的准确性，重叠校正、脉冲编缉、噪声和堵孔监测等技术运用于分析仪中。1.重叠校正两个细胞同时出现在检测小孔的感应区可能会只产生一个脉冲信号。对每一个脉冲信号进行鉴别和分析，运用校正计算[6]，补偿重叠引起的计数误差，见图1-4。??????? ???????? ?????????????? 图1-4???????? (a)??? ???????? ?? (b) 2. 脉冲编缉小孔的检测电流和稀释液流经小孔时，在小孔区域形成非均匀的电场和流速场。接近小孔轴线区域的电场强度和流速比较一致，而小孔边缘区域的流速较轴线区域慢，特别是小孔出入口边缘区域的流速慢和电场强度大。同样的细胞流过不同的路径，会感受不同的电场和流速场，形成不同高度和宽度的脉冲信号。图1-5(a)所示的X、Y、Z路径产生图1-5(b)所示的三个不同的细胞脉冲信号。?? ??????????????????????????????????? ?????????????