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细胞生物学中的多维蛋白质组 主讲人：姜军欢 翻译文献：何寿鹏 ppt 制作：陈念航 有关资料的查询：何，姜，陈 Time ：2016-3-31 蛋白组是个动态的系统，蛋白质之间 的关联（维度），形成了细胞的表型 由于基于光谱测定法的发展，发现了 蛋白质的不同性质。 单维度的蛋白质分析会导致生物信息分析不准确，因此我 们用到Spectrometry-based(基于光谱测定法)。 该技术结合改进的工具、分析方法、实验技术注释蛋白质 的多维信息（例如蛋白质降解、蛋白质的合成与转化率） 通过以测量的信息，我们还能得到有关蛋白质的某些属性： 如亚细胞定位、蛋白质丰富度、组织分布，以及蛋白质亚 型或者突变型。 不同的亚细胞内或者细胞周期阶段 样本相对量化（丰富度） SILAC ：用细胞培养中稳定同位素标记氨基酸的方法该 方法是在细胞培养的过程中加入稳定同位素标记的必需 氨基酸如赖氨酸( K) 和精氨酸( R) ，使每条肽链相差质 量数恒定。 TMT:串联质量标签 iTRAQ ：等重同位素标记相对与绝对定量方法 iTRAQ和TMT是最常用的基于报告离子的蛋白质组相对 定量方法，通过方法改进或者与其他方法结合，可实现 更多重的标记，进而提高蛋白质组相对定量的通量。 相对定量是研究不同情况下同一蛋白质组样品组成含量的变化，如细胞受 到刺激前后蛋白质表达的差异。 结合色谱法和离心分离可以 更容易地组合多个分离的多 维蛋白质 生物方面 亚细胞定位 亚细胞定位对于蛋白 GFP 能自我催化形成 GUS 基因克隆后, 很 质功能是非常重要的! 发色结构并在蓝光激 快就发展起以GUS作 蛋白质必须处于合适 发下发出绿色荧光, 为基因标记的系统 。 的亚细胞定位才能行 所以可以与目标蛋白 GUS 基因表达产物具 使其功能 融合, 作为荧光标记 有检测容易、灵敏度 分子, 特异性地进行 高、易于定量及定性 蛋白质的亚细胞定位。 分析的优点。由于在 融 绝大多数植物的细胞 GFP 能在蛋白质的N 合 内不存在内源的GUS 端或C 端融合而保持 报 活性, 所以检测弱启 其天然蛋白的特性, 告 动子驱动的GUS 活性 基 而且灵敏度高、对活 则更容易、更精确. 细胞无毒害作用, 因 的 方 法