抗核抗体(ANA)检测标准操作程序1.0.doc

Written by编制人：Date日期: 200Effective Date生效日期: Distribution Scope发放范围: Autoimmune Lab自身免疫室 Reviewed by审核者： Approved by批准人： Document Annually Reviewing文件年度审核 Reviewed by审核者： Reviewed by审核者： Reviewed by审核者： Date日期： Date日期： Date日期： Reviewed by审核者： Reviewed by审核者： Reviewed by审核者： Date日期： Date日期： Date日期： 间接免疫荧光法检测抗核抗体（ANA）标准操作程序 检测信息方法 国食药监械（准）字2006第3400159号 2.检测原理 如果标本阳性，在第一次温育时，已稀释血清中的特异性IgG、IgA和IgM抗体与固定在载片上生物薄片中的HEP-2细胞和灵长类肝脏反应；在第二步，这些抗体与荧光素标记的抗人抗体反应，然后在荧光显微镜下观察特异性的荧光模型。 3.样本要求 病人准备事项 禁食/特种饮食 病人的准备事项 样本采集特殊要求 避免中、重度溶血 其他 无 3.2样本类型及处理方法 类型 推荐类型 血清 可接受类型 EDTA、肝素或柠檬酸盐抗凝的血浆 样本量 最佳量 2.0 mL 最少量 1.0 mL 收集容器 带塞标本管 运输容器 标本架或（及）专用标本箱。 运输要求 在室温条件下运送，运输箱内建议保持冷藏温度。 稳定性及储藏要求 室温 冷藏温度（2-8(C） -20(C 3月 -70(C ?6月 时间要求 无 样本拒收及采取措施 拒收中度、严重溶血及被微生物污染、加热灭活的标本 影响／干扰因素 无 其它条件 标本冷冻保存，避免反复冻融。 4.试剂 德国欧蒙医学实验诊断公司 试剂名称 试剂型号及规格 储藏及稳定性 准备工作 生物载片 10*1、5*1、3*1 若将未开封试剂储藏于2-8(C（制造商所要求），可维持稳定直至制造商标出的过期日期。 室温平衡30分钟 荧光素 1.5mL/瓶 PBS干粉 10g/包 吐温 2mL/瓶 注意事项：开启所有试剂（包括校准品、标准品）需注明日期及签名。每个试剂容器都需贴上写有以下内容的标签：启用日期、截至日期。开启时应检查试剂是否变色，是否有肉眼可见的细菌生长迹象、浊度、沉淀反应等，这些表示已经变质或超过保质期。 5.仪器 6.3 变异系数：本专业组不涉及此内容本专业组不涉及此内容μL血清用1.0mLPBS-吐温缓冲液稀释混匀。 8.3 加样： 将加样板放在泡沫板上,按顺序分别滴加25μL稀释后血清至加样板的每一反应区,避免产生气泡；加完所有待测标本后再开始温育(最多200份)。 8.4 温育: 将载片覆有生物薄片的一面朝下,盖在加样板的凹槽里,反应立即开始。确保每一样品均与生物薄片接触且样品间互不接触,室温(18-25℃)温育30分钟，注意避免阳光直射载片。 8.5冲洗: 用烧杯盛PBS吐温缓冲液流水冲洗载片1秒钟,然后立即将其浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中浸泡至少5分钟。 8.6加样: 滴加20μLFITC标记的抗人IgG(荧光二抗)至洁净加样板的反应区。 8.7 温育: 从洗杯中取出一张载片,5秒钟内用吸水纸擦去背面和边缘的水分后,立即盖在加样板的凹槽里。为防止破坏基质,不要擦拭反应区的间隙.确保生物薄片与液滴接触良好,然后继续下一张。室温(18-25℃)温育30分钟,注意避免阳光直射载片。 8.8 冲洗: 用烧杯盛PBS吐温缓冲液流水冲洗载片1秒钟,然后立即将其浸入装有PBS吐温缓冲液的洗杯中浸泡至少5分钟。 8.9封片: 将盖玻片直接放在泡沫板的凹槽里。滴加甘油至盖玻片:每一反应区10μL。从PBS吐温缓冲液中取出一张载片,用纸擦干背面和边缘的水分,注意不要擦拭反应区间隙。将载片覆有生物薄片的一面朝下放在已准备好的盖玻片上,立即查看并轻轻调整使盖玻片嵌入到载片的凹槽里。 9. 结果计算 本不涉及此内容结果报告 结果到LISANA）对很多自身免疫性疾病有诊断价值，不同的疾病(特别是风湿性疾病)有不同的特征性抗体谱。 11.1.1抗着丝点抗体对系统性硬化症局限型（CREST综合征）有确诊意义。并对该型疾病特异性高，有很高的阳性率（70%-90%）。 11.1.2抗板层素抗体有时可见于慢性活动性自身免疫性肝炎的活动期。 11.1.3 抗波形蛋白抗体罕见,临床意义所知甚少，有待发现。 11.1.4抗纺锤体抗体怀疑与某些肿瘤有关，如燕麦细胞支气管肺癌。 11.1.5抗肌动蛋白抗体与自身免疫性肝炎的慢性活动型相关。