免疫学应用-本科.pptVIP

掌握：抗原或抗体检测的基本原理；凝集反应、沉淀反应的概念及方法。人工主动免疫和人工被动免疫的概念和特点。 熟悉：熟悉免疫标记技术的常见方法；免疫预防和免疫治疗的基本概念和种类。 了解：细胞因子的检测。免疫重建的概念；常用免疫增强剂、免疫抑制剂及新型疫苗的发展。 免疫学检测 利用免疫学原理建立的免疫学检测技术主要应用于对多种免疫性疾病（感染性疾病、免疫缺陷病、超敏反应、自身免疫病、移植排斥反应和肿瘤等）的诊断、疗效评估、发病机制探讨、以及对抗原性物质或免疫细胞的定性、定量，对细胞因子、粘附分子及细胞受体的检测等。 抗原或抗体检测 免疫细胞的检测 免疫分子的检测 一 抗原或抗体的检测 抗原-抗体反应： 指抗原与相应抗体在体内外高度特异性结合。在合适体外条件下可呈现凝集、沉淀等现象。 抗原或抗体的检测即用肉眼观察或借助仪器对样品中的抗原或抗体进行定性、定量或定位检测。 抗原-抗体检测技术应用 1.已知的抗原检测未知的抗体 2.已知的抗体检测未知的抗原 3.体内各种大分子物质 4.已知抗体检测半抗原 抗原抗体反应的特点 特异性：抗原表位和抗体可变区之间的空间构象互补 可见性：抗原抗体比例 可逆性：非共价可逆性结合 抗原抗体比例对反应现象的影响 1 电解质：抗原-抗体反应通常应用0.85%的氯化钠作为稀释液，以供给适应浓度的电解质。 2 温度：一般常使用反应在37度水浴或孵育箱中进行。 3 酸碱度：抗原-抗体反应适应的酸碱度一般为PH6～8。 4.抗原和抗体的性质 抗原-抗体反应检测方法 凝集反应 沉淀反应 补体参与的反应 免疫标记技术 凝集反应（agglutination） 细菌、红细胞等颗粒性抗原与相应抗体结合后形成凝集 现象，称为凝集反应。 直接凝集：将细菌或红细胞与相应的抗体直接反应，出现细菌凝集或红细胞凝集现象。又分为玻片法和试管法。 间接凝集：将可溶性抗原包被在红细胞或乳胶颗粒表面，与相应抗体反应出现颗粒凝集现象。 沉淀反应（ precipitation ） 可溶性抗原（血清蛋白质、细胞裂解液或组织浸液等）与相应抗体结合后，在一定条件下，出现肉眼可见的沉淀。 补体参与的反应 补体结合试验是一种有补体参与，并以绵羊红细胞和溶血素（红细胞的特异抗体）是否发生溶血反应作指示的一种高灵敏度的抗原与抗体结合反应。 免疫标记技术 用荧光素、酶或放射性核素等标记抗体或抗原，进行抗原抗体反应，提高了抗原抗体反应的敏感性。 免疫荧光法：常用FITC、PE等 酶免疫测定：常用HRP、AP等 放射免疫测定：常用125I 和131I 化学发光免疫分析 免疫印迹(Western Blot) 二 免疫细胞的检测 检测各群体淋巴细胞的数量与功能是观察机体免疫状态的重要手段。外周血是病人主要的检测标本，但仅代表再循环的淋巴细胞。实验动物还可取胸腺、脾、淋巴结等作为标本进行检查。 2.亚群的分离 尼龙棉柱分离----B细胞 E花环分离---------T细胞 流式细胞术 免疫磁珠 3.淋巴细胞亚群的计数 根据表面标志不同，分类计数 免疫荧光 CDC （2）免疫细胞功能测定 1、T细胞功能试验： T细胞增殖试验 3H-TdR掺入法 MTT法 细胞毒试验 2、B细胞功能测定：溶血空斑试验 3、皮肤实验： 检测细胞免疫功能 三 免疫分子的检测 1. Ig检测 已知抗原检测 已知抗体定性、定量检测：免疫比浊等 2. C检测 免疫比浊、 ELISA、RIA等。 3. CK检测 增殖法、集落形成法、胞毒活性测定 PCR、原位杂交技