3.2蛋白质共价结构2培训讲解.pptVIP

生 物 化 学;第二节 蛋白质的共价结构;蛋白质的结构概述 肽 蛋白质的一级结构 蛋白质的化学合成;一、蛋白质的分子大小;单体蛋白质(monomeric protein)：仅由一条多肽链组成。其相对分子量除以110估计氨基酸残基的数目。 寡聚蛋白质(oligomeric protein)：由两条或多条多肽链组成。每条多肽链称为亚基(subunit)。;简单蛋白;结合蛋白;二、蛋白质结构的组织层次;二级结构(secondary structure)：多肽链主链中各个肽段形成的规则的或无规则的构象。主要有α-螺旋、β折叠、β-转角、无规卷曲。;三级结构(tertiary structure)：多肽链通过盘旋、折叠，形成紧密的借各种次级键维持的球状构象。;;四级结构(quarternary structure)：具有二条或二条以上独立三级结构的多肽链组成的蛋白质，其多肽链间通过次级键相互组合而形成的空间结构。;; 一级结构（氨基酸顺序、共价结构、主链结构） ↓ 二级结构（α-螺旋、β折叠、β-转角、无规卷曲） ↓ 超二级结构 ↓ 结构域 ↓ 三级结构（球状结构） ↓ 四级结构（多亚基聚集体）;三、肽;（一）肽和肽键的结构;由两个AA组成的肽称为二肽。 由多个AA组成的肽则称为多肽。 组成多肽的AA单元称为氨基酸残基。;肽链写法：游离α-氨基在左，游离α-羧基在右，氨基酸之间用“-”表示肽键。;;①肽键中C-N键有部分 双键性质 ——不能自由旋转 ②组成肽键原子处于 同一平面（肽平面） ③键长及键角一定 ④大多数情况以反式 结构存在;;（二）肽的物理和化学性质;2、一般短肽的旋光度约等于组成该肽中各个氨基酸的旋光度的总和，但较长的肽或蛋白质的旋光度则不能这样简单相加。 紫外吸收215nm处有吸收峰，可用作肽的定量测定;3、肽的化学反应也和氨基酸一样，游离的α-氨基、α-羧基和R基可以发生与氨基酸中相应的基团类似的反应。;1）茚三酮反应：肽的N端氨基酸残基和茚三酮也能发生定量反应，生成蓝紫色复合物??用于肽的定性和定量测定。但是这个反应不会释放CO2。;2）双缩脲反应：双缩脲可与CuSO4反应，生成紫红色复合物。 凡是分子中含有两个或两个以上酰胺基的化合物均会发生双缩脲反应。 此反应是肽和蛋白质所特有的。;（三）天然存在的活性肽;;四、蛋白质的一级结构;;1.样品必需纯（97%以上） 2.知道蛋白质的分子量 3.知道蛋白质由几个亚基组成 4.测定蛋白质的AA组成并根据分子量 计算每种AA的个数 5.测定水解液中的氨量计算酰胺的含量;（一）蛋白质测序的策略;将肽段顺序进行叠联以确定完整的顺序;1.样品的纯度要求：97％ 检测方法：双向电泳，离子交换，N－末端分析，亲和层析，肽谱分析，Western Blotting, MS及LC/MS测定 一般采用单项电泳＋末端一个残基;2、分子量测定：SDS, MS, LC/MS 3、蛋白质内多肽链的数目及大小 N－末端测定， C－末端测定，还原后SDS分离或HPLC分析。 4、多肽链的拆分;几条多肽链借助非共价键连接在一起，称为寡聚蛋白质，可用8mol/L尿素或6mol/L盐酸胍处理，即可分开多肽链(亚基)。;1、N-末端分析;;此法的优点是丹磺酰-氨基酸有很强的荧光性质，检测灵敏度可以达到1?10-9mol。;苯异硫氰酸法（PITC）;目前常用的羧肽酶有四种：A,B,C和Y；A和B来自胰脏；C来自柑桔叶；Y来自面包酵母。 羧肽酶A能水解除Pro,Arg和Lys以外的所有C-末端氨基酸残基；B只能水解Arg和Lys为C-末端残基的肽键。;（三）二硫桥的断裂;S;用于蛋白的氨基酸组成测定的水解方法主要是酸水解，同时辅以碱水解。;（五）多肽链的部分水解和肽段的分离纯化;胰凝乳蛋白酶(Chymotrypsin)：断裂键邻近的基团是碱性的，裂解能力增加；是酸性的，裂解能力将减弱。;肽链;葡萄球菌蛋白酶（Staphylococcal protease) 当裂解