微生物标准规范操作规程六.docVIP

XXX人民医院检验科微生物室 标准操作文件 文件编号：WSW-SOP-007 版本号：2007 第1次修改 编写者：XXX XXX 审核者：XXX 修订日期：2012年1月15日 页码：第 1 页 共 2 页 粪便标本细菌学检验标准操作规程 1．目的 规范粪便标本细菌学检验标准操作规程，确保检验结果准确可靠。 2．适用范围 粪便培养。 3．标本 3.3.1 标本类型 粪便、直肠拭子。 3.2 标本采集 3.2.1 自然排便采集 自然排便后，挑取其脓血、黏液部分2～3 g，液体粪便取絮状物2～3 ml，盛于灭菌容器内，或置于保存液(运送培养基)、增菌培养基中送检。 3.2.2 直肠拭子 如不易获得粪便时，或排便困难病人及婴儿，可用直肠拭子采取，即以无菌棉拭用保存液或生理盐水湿润后，插入肛门内4～5 cm（幼儿 2～3 cm)轻轻转动取出，插入卡一布(Cary—Blair)运送培养基内或无菌容器内送检。 3.2.3 粪便标本应该立即送检，室温保存不能超过2小时，如不能及时送检可以放人磷酸盐甘油(pH 7 0)或转运培养基，但不能超过24小时。培养艰难梭菌的标本保于-20℃以下。培养沙门菌和志贺菌的标本应放置磷酸盐甘油溶液中保存。保存弯曲杆菌和弧菌的标本，需加CaCl2(100mg／L)试剂。 3.3 标本拒收标准 3.3.l 粪便标本放置时间超过2小时。 3.3.2 送检的粪便标本混有尿液。3．3 3直肠拭子未置于运送培养基中。 4．试剂、仪器 4.1 革兰染液、氧化酶试剂、麦康凯平板、SS平板、TCBS平板及相关生化试剂等。 4.2 VITEK鉴定系统；革兰阴性菌鉴定卡(GNI+)、革兰阴性细菌药敏卡(GNS)、革兰阳性菌鉴定卡(GPI)、革兰阳性细菌药敏卡(GPS)、真菌鉴定卡(YBC)、药敏纸片、ATB板条等，有效期及储存条件参见试剂说明书。 4.3 接种针、接种环、电热灼烧器、显微镜、孵育箱、C02培养箱等。 4.4诊断血清。 5．细菌鉴定和药敏质控 参见《质量管理程序》。 6．检验步骤 接收标本后，立即对标本进行编号、登记。 6.1 涂片检查 粪便标本因各种正常菌群含量甚多，仅以染色性和形态无法分辨是否为病原菌。因此，粪便标本一般不作涂片检查。只有怀疑霍乱弧菌及菌群失调所致腹泻时，才作直接涂片检查(观察动力和菌群比例)。 6.2 培养 6.2.1 沙门志贺菌培养 参见《沙门菌属检验标准操作规程》、《志贺菌属检验标准操作规程》。 6.2.2 致病性大肠埃希菌培养 参见《致病陛大肠埃希菌检验标准操作规程》。 6.2.3 霍乱弧菌培养 参见《霍乱弧菌检验标准操作规程》。 6.2.4 副溶血弧菌培养 参见《副溶血弧菌检验标准操作规程》。 6.2.5 小肠结肠炎耶尔森菌培养 参见《耶尔森菌属检验标准操作规程》。 6.2.6 空肠弯曲菌培养 参见《弯曲菌属检验标准操作规程》。 6.2.7 金黄色葡萄球菌培养 参见《葡萄球菌属检验标准操作规程》。 6.2.8 艰难梭菌培养 取水样或黏液样粪便立即接种于环丝氨酸头孢西丁果糖琼脂(简称CCFA)平板上，并将粪便作10^2～10^6稀释后定量接种。35℃厌氧环境下培养48小时后，选择粗糙型黄色菌落，移种于葡萄糖庖肉培养基作毒素测定；同时制涂片，悬滴检查动力、革兰染色及生化鉴定。 6.2.9 真菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 6.2.10 气单胞菌和邻单胞菌的培养 参见《气单胞菌属检验标准操作规程》和《邻单胞菌属检验标准操作规程》。 6.2.11 结核分枝杆菌培养 参见《分枝杆菌属检验标准操作规程》。 7．操作流程 粪便或肛拭 根据临床需求 需氧培养 分离致病性大 SS，XLD或HE平板 分离弯曲菌 分离弧菌 肠埃希菌O157 35℃培养18～24h 观察菌落特征 Campy-BA平板，35℃ TCBS平板 山梨醇麦 涂片，染色 微需氧培养48 h 康凯平板 双糖铁或三糖铁 观察菌落特征 观察菌落特征及、 涂片、染色 涂