《狂犬病疫苗简介》.docVIP

成大生物狂犬病疫苗 一)?技术来源1984年11月，世界卫生组织（WHO）和洛克菲勒基金会（RF）开始一项合作项目——以Vero细胞为基质工业化生产狂犬病疫苗。历时15年的努力，科学有效地解决了生产、纯化中的诸多问题。1999年，该技术生产的高品质人用狂犬病纯化疫苗首先被批准在哥伦比亚使用，经过5年的实践，证明具有卓越的安全性和免疫效果。该技术的核心在于实现了细胞的悬浮培养。(二)?主要技术1、?高密度微载体技术1)?微载体的诞生实现了细胞从贴壁生长到悬浮培养的革命。成大速达?的微载体技术指标：?1个微载体= 180μm?1克微载体（干重）= 4,400cm2?500克微载体= 1,000转瓶（3升转瓶）?7.5升反应器= 150 克微载体 = 350 转瓶?30升反应器 = 750 克微载体 = 1,750 转瓶?细胞密度: 10 x 106个细胞/ml?细胞生长 30 L 生物反应器 = 7 天?病毒生长天数 = 20 天 从上图我们可以看到细胞在微载体表面生长的非常好，细胞密度达107/ml。刚才已经谈过，巴斯德PV2061狂犬病固定毒毒株是WHO公认的免疫原性高的Vero细胞适应株，因此，接种病毒后，连续收获病毒的滴度很高，这样从技术上就保证了成大速达?0.5ml的小剂量里面，能够含有较高的抗原蛋白和较少的杂蛋白。? 2)?生物反应器为大规模细胞培养提供了设备支持。 全自动、封闭式、管道化的生物反应器3)?比照传统生产工艺，微载体高密度细胞培养的优势：* 高细胞密度* 高病毒收获* 低污染的机会* 生产工艺可控性强* 微载体投放量高达25g/L，细胞密度高达1.1-1.5x107/ml，远超过其他工艺（转瓶、细胞工厂、其他类型反应器）。2、?四柱层析纯化系统 从前面的工艺流程中，我们已经知道，收获的病毒液必须经过无菌连接的管道化的澄清过滤和超滤浓缩后，灭活，然后，进行层析纯化。下面的图中显示先进的纯化设备和训练有素的工作人员在操纵全自动的装备，经过这道关键的工艺后，有效地去除99.95%的杂蛋白和Vero细胞DNA，保证了成大速达?具有卓越的安全性。 下面的3个图是连续3批层析纯化后收获峰：左侧峰为病毒峰，可以看出与杂蛋白峰距离很远，3批峰形稳定，收获的抗原含量高，杂蛋白低，3批的批间差异非常小，从而保障不同批次成大速达?的都具有卓越的安全性。优势：有效地去除残余牛血清蛋白、细胞碎片、残余细胞DNA等杂质，使产品达到高质量的标准3、?来源及代次清晰的毒株和细胞1)?成大速达?的Vero细胞：原始细胞库：引进美国ATCC的P134代细胞。主细胞库：由原始库细胞传代至136代构建。工作细胞库：由主库细胞传代至138代构建。生产使用的细胞最多不会超过143代。2)?成大速达?毒株来源和谱系： PV-2061毒株谱系 来源：美国疾病预防控制中心（CDC）谱系：巴斯德PV2061特征：VERO细胞适应的固定毒株代次：第15代被全球多个国家使用生产狂犬疫苗，证明为优良毒种。 * 成大速达?的主要生产步骤：主细胞库中136代Vero细胞经过复苏，在转瓶内37培养，2次传代扩增至138代成为工作细胞，将扩增好的工作细胞移到生物反应器内，微载体高密度悬浮培养7天，细胞密度达到107个/毫升，这时Vero细胞不超过143代。加维持液中止细胞培养，接种巴斯德PV2061毒种，3天后开始连续收获病毒20天。测定收获的病毒液的小鼠滴度，应用全程无菌连接的澄清过滤和超滤浓缩管线浓缩约20倍后，用β-丙内酯4灭活，灭活验证试验合格后，进行层析纯化，有效地去除残余牛血清、细胞碎片、残余细胞DNA等杂质，使产品达到高质量的标准。 对层析纯化收获液进行质量检定，合格后，无佐剂进行半成品配制。经过灌封、轧盖、包装到成品。成品质量检定，效力大于等于4.5IU/剂，374周大于等于2.5 IU /剂。冻干378周大于等于2.5IU/剂。 成大速达TM的主要生产步骤 不同生产工艺的比较这里是生物反应器、转瓶、细胞工厂等3种工艺流程病毒收获液小鼠滴度比较。 从图中可以看出，利用生物反应器微载体高密度悬浮培养收获液的病毒滴度，比其他生产工艺高10倍以上，而且生物反应器工艺可以连续高滴度收获20天。因为单位体积内有效抗原含量非常高，从而保证了产品最终效价。 成大速达?产品特点? 成大速达以Vero细胞为基质，采用生物反应器微载体高密度培养方法，使用巴斯德PV2061毒株制备的人用狂犬病纯化疫苗。 * 成大速达?产品具有以下特点： 1、免疫原性：连续108批平均出厂效价6.72IU/剂，三期及上市后临床研究显示，首针接种后7天部分接种者抗体阳转，14天后抗体阳转率达到100%，快速产生高