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HCV-NS3抗原基因的克隆表达及活性测定 围医学检验杂志2005年旦筮鲞箜塑塑!』ou婴0fi望!!!!g:. HCV—NS3抗原基因的克隆表达及活性测定 CLONING,EXPRESSIONANDACTIVITYDETERMINATION OFGENEOFHCV—NS3ANTIGEN 宋晓国陈坤张贺秋王国华胡魏朱翠侠冯晓燕凌世淦 (军事医学科学院基础医学研究所,北京100850) 253 【论着】 【OriginalArticle】 摘要[目的]研制新的更符合我罔HCV感染株的NS3抗原,以进一步提高HCV免疫检试剂的灵敏度.[方法]对HCV/ NS3(1192—1457aa)片段序列进行在线Blast分析,根据共有序列(consensus)设计并合成引物.以Trizol法从病人血清中提取总 RNA,经反转录PCR扩增获得NS3相应目的基阒,捅人载体,经测序正确后,克隆表达,表达产物经纯化后H{间接ELISA法测定其 反应活性.[结果]从病人血清中获得了NS3部分基闪片段,测序证明所获得的序列和我们以前的la型NS3序列有l8个不同的 氨基酸残基.重组新NS3抗原经活性测定,反应灵敏度有较大提高.[结论]新获得的HCV—NS3町用于试剂盒抗原,以提高对 我日HCV感染病人检测的灵敏度. 关键词丙型肝炎病毒;HCV—NS3抗原;克隆表达 Cloning,expressionandactivitydeterminationofgeneofHCV—NS3antigen Xiaoguo,ChenKun,ZhangHeqiu,etal,InstituteofBasicMedicalSciences,AcademyofMilitaryMedicalSciences,Beijing100850, China Abstract[objective]TodevelopanovelHCV—NS3antigentosuittheinfectedstrainsinChinaandenhancethesensitivityofEIA kit,[Methods]BasedontheconsensussequenceofHCV/NS3(1192—1457),asetofprimersweredesignedandsynthesized,andthe totalRNAextractedfromanHCVinfectedpatientsserumbymeansofTrizo1.AfterRT—PCRamplification.aninterestedNS3genewas gainedandcloned,ThenovelgeneWasfurthersequencedandexpressedinE,coli.ThereactivityofthepurifiedrecombinantNS3withthe third—generationHCVpanelwasdeterminedbyELISA.』Results1ThenewlyclonedNS3hadl8difierentamino—acidresiduesfromthe formerNS3(typela)antigen.Meanwhile,ithadhighersensitivitythantheformerNS3antigenfordetectionofthethird—generationpan— e1.[Conclusion]ThenewlydevelopedNS3antigencanbeusedastheantigeninHCVEIAkittoimprovethesensitivityofdetectionin China. KeywordsHCV;HCV—NS3antigen;Cloning;Expression [中罔分类号]R373.2[文献标识码]A[文章编号]1606—8025(2005)04—253—03 丙型肝炎是危害人类健康的重要传染病之一,其传播途 径主要是通过注射被污染的血清及血液制品.丙型肝炎病毒 (HCV)属于黄病毒科,为单股正链RNA病毒,其基全长约 为9.5Kb.目前对该病毒的检测,主要是用ELISA法测定血 清中HCV抗体…,而用以包被测定板的抗原主要是HCV的结 构区核心蛋白(core),非结构区蛋白(NS3,NS4,NS5),其中 NS3蛋白极为重要.于洋等对同产抗HCV酶联免疫诊断试剂 质量进行了分析,结果是同产试剂漏检及假阳性的主要原因 为HCV—NS3抗原相对较弱引起.以前我们曾以本室所保 存的HCV全基因质粒pBRTM/HCV(1a)为模板,用PCR法扩 增出了NS3部分基因片断(1192一l154aa),并在pBVIL1载体 中获得了高效表达.该抗原和核心抗原