吉林省长春汽车经济技术开发区第一中学2018届高三二轮复习素材：人教版生物选修一生物技术实践知识复习图解.doc

选修1《生物技术实践》知识归纳图解 （一）培养基的基本知识 1．培养基的营养成分 营养物质 定义 作用 主要来源及所涉及的微生物 碳源 凡是能提供微生物所需碳元素的物质 构成生物细胞、生物体及细胞代谢产物，有些能为异养生物提供能源 无机化合物：C02、NaHC03等(自养生物) 有机化合物：糖类、脂质、花生粉饼、石油等(异养生物) 氮源 凡是能提供微生物所需氮元素的物质 合成蛋白质、核酸及含氮的代谢产物，也可为异养微生物提供能源 无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐，自养生物有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等，异养生物 水分 生物体内含量最高的组成成分，分为结合水和自由水[来源:学科网ZXXK][来源:学|科|网Z|X|X|K][来源:Zxxk.Com][来源:学,科,网Z,X,X,K][来源:Z*xx*k.Com] 项目 概念 常用方法 应用范围 消毒 使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或内部一部分对人体等有害的微生物(不包括孢子和芽孢) 巴氏消毒法：70～75℃水中煮30min或在80℃水中煮15min 一些不耐高温的物体如牛奶 煮沸消毒法：在100℃水浴中煮沸5～6 min 一般物品 化学药剂消毒法：用乙醇、氯气、漂白粉、KMnO4等药剂来杀死或抑制细菌生长或繁殖 可用来对环境、双手和衣物等消毒 紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min 接种室 灭菌 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子 灼烧灭菌法：酒精灯火焰 接种工具如接种环、接种针等 干热灭菌法：在160～170℃加热1～2h 如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具 高压蒸汽灭菌：压力为100 kPa，温度为12l℃的条件下，维持15～30 min 培养基及容器的灭菌 注意： ①无菌操作是微生物培养过程中，防止杂茵污染的关键步骤。 ②消毒只能消灭或抑制营养体的活动，而不能达到彻底灭菌。酒精消毒用体积分数为70%的酒精效果最好，因浓度过高，会使菌体表面蛋白凝固成一层保护膜，乙醇分子不能进入其中；浓度过低，杀菌力减弱。而灭菌除杀死营养体外，还必须杀死芽孢和孢子。 ③灭菌消毒的原理，就是通过一定理化手段，使病原茵蛋白质变性，失去生命活性。 （三）微生物的纯化培养技术 1．常用细菌培养基——蛋白胨培养基配制流程： 2．纯化大肠杆菌 Ⅰ．原理：在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是纯化的细菌菌落。 Ⅱ．微生物接种方法： (1)平板划线法：平板划线法中细胞的分离和稀释过程发生在接种环在固体平板表面上的划线和移动过程中。在线的开始部分，微生物往往连在一起生长，随着线的延伸，菌数逐渐减少，最后可能形成纯种的单个菌落。(如图) (2)稀释涂布平板法：10倍系列稀释操作 划线操作时注意： （1）用接种环取菌种之前、每次划线之前和划线结束都要进行灼烧灭菌，灼烧后要在酒精灯附近冷却后再操作；(第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。每次划线之前：杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。划线结束后：杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者) （2）划线时不要划破培养基，如果采用分段划线法操作从第二次操作应总在上一次划线末端开始，首尾区不能相连； （3）操作必须始终在酒精灯火焰旁进行。 涂布操作时注意： （1）配制系列梯度稀释液时，所用的试管和移液管均需灭菌，必须用无菌水配制； （2）涂布器用70%的酒精消毒，多余酒精在烧杯中滴尽，沾有少量酒精的涂布器在酒精灯火焰引燃。不要将过热的涂布器放入盛有酒精的烧杯中，一面引燃其中的酒精； （3）配制系列梯度稀释液和转移菌液以及涂布过程等必须都在酒精灯火焰旁进行，移液管头不能接触任何物体。 3．菌种的保存 ①对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法。 ②对于需要长期保存的菌种，可以采用甘油管藏的方法。 注意：①菌种保藏的原理是：低温、干燥和隔绝空气，使微生物代谢能力和繁殖能力降低。 ②不同菌种的保藏方法因不同菌种而异。需氧型，必须低温有氧，而厌氧型必须低温无氧；腐生微生物可提供牛肉膏蛋白胨培养基，而寄生微生物需提供活体组织等非人工培养基，如病毒需提供活鸡胚。 （三）微生物的筛选与计数（以“土壤中分解尿素的细菌”为例） 一、果胶酶的组成和作用：包括多聚半乳糖醛酸酶、果胶分解酶、果胶酯酶等。果胶酶能分解果胶，瓦解植物的细胞壁及胞间层。其实质是果胶分解成可溶性的半乳糖醛酸。 注意：①果胶酶是分解果胶的一类酶的总称，不是一种酶。 ②植物、霉菌、酵母菌等细胞均能产生果胶酶，但通常动物细胞不产生果胶酶。 ③在植物细胞工程中，应用纤维素酶和果胶酶来破坏细胞壁，获得原生质体。 二、探究温度对