流式细胞术的历史关键词流式细胞术FlowCytoMeterFCM.PDFVIP

一篇：流式细胞术的历史 关键词：流式细胞术（Flow CytoMeter, FCM ） 概要说来，流式细胞术主要包括了样品的液流技术、细胞的分选和计数技术，以及数据的采 集和分析技术等。FCM 目前发展的水平凝聚了半个世纪以来人们在这方面的心血和成果。 1934 年，Moldavan1 首次提出了使悬浮的单个血红细胞等流过玻璃毛细管，在亮视野下 用显微镜进行计数，并用光电记录装置计测的设想，在此之前，人们还习惯于测量静止的细 胞，因为要使单个细胞顺次流过狭窄管道容易造成较大的细胞和细胞团块的淤阻。1953 年C rosland Taylor 根据雷诺对牛顿流体在圆形管中流动规律的研究认识到：管中轴线流过的鞘 液流速越快，载物通过的能力越强，并具有较强的流体动力聚集作用。于是设计了一个流动 室，使待分析的细胞悬浮液都集聚在圆管轴线附近流过，外层包围着鞘液；细胞悬浮液和鞘 液都在作层液。这就奠定了现代流式细胞术中的液流技术基础。 1956 年，Coulter 在多年研究的基础上利用Coulter 效应生产了Coulter 计数器。其基本 原理是：使细胞通过一个小孔，只在细胞与悬浮的介质之间存在着导电性上的差异，便会影 响小孔道的电阻特性，从而形成电脉冲信号，测 电脉冲的强度和个数则可获得有关细胞大 小和数目方面的信息。1967 年Holm 等设计了通过汞弧光灯激发荧光染色的细胞，再由光电 检测设备计数的装置。1973 年Steinkamp 设计了一种利用激光激发双色荧光色素标记的细胞， 既能分析计数，又能进行细胞分选的装置。这样就基本完成了现代FCM 计数技术的主要历程。 现代的FCM 数据采集和分析技术是从组织化学发源的，其开拓者是Kamentsky 。1965 年，Kamentsky 在组织化学的基础上提出了两个新设想： （1）细胞的组分是可以用光光度学 来定 测定的，即分光光度术可以定 地获得有关细胞组织化学的重要信息。（2 ）细胞的不 同组分可以同时进行多参数测 ，从而可以对细胞进行分类。换句话说，对同一细胞可以同 时获得有关不同组分的多方面信息，用作鉴别细胞的依据。 流式细胞术在细胞化学中的应用的先驱者是Van Dilla 和美国的Los Alamos 小组。他们 在1967 年研制出流液束、照明光轴、检测系统光轴三者相互正交的流式细胞计的基础上，首 次用荧光Feulgen 反应对DNA 染色显示出DNA 的活性与荧光之间存在着线性关系，并在D NA 的直方图上清楚地显示出细胞周期的各个时相。Gohde 和Dittrich 接着把这项技术推向实 用，他们用流式细胞术测定细胞周期借以研究细胞药代动力学问题。FCM 用于免疫组织化学 中的关键是对细胞进行免疫荧光染色，其它和在细胞化学的应用并没有多大差异。 （下 为 一DNA 直方 ） 二篇：流式细胞仪的工作原理 生物秀-专心做生物 www . 将待测细胞染色后制成单细胞悬液。用一定压力将待测样品压入流动室，不含细胞的磷酸缓 冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管入口方向与待测样品流成一定角度，这样，鞘液就能够 包绕着样品高速流动，组成一个圆形的流束，待测细胞在鞘液的包被下单行排列，依次通过 检测区域。 物 流式细胞仪通常以激光作为发光源。经过聚焦整形后的光束，垂直照射在样品流上，被 生 荧光染色的细胞在激光束的照射下，产生散射光和激发荧光。 （如下 ：FSCSSC） m 做o c 心o. 专 o i