碱提酸沉法分离花生蛋白条件的研究.docVIP

碱提酸沉法制取花生分离蛋白的优化条件 李明姝 （ 四川大学轻纺与食品学院，610065 成都市 ） 摘要：采用碱提酸沉法研究了制取花生分离蛋白的优化条件。结果显示，当花生粕的匀浆料液比为1:8（m/v）、碱浸提液pH为8.2、浸提温度为60℃，重复浸提两次，每次浸提2h，酸沉pH为4.5时，制取的花生分离蛋白纯度可达90.21%，蛋白质回收利用率可达75.74%。研究结果可为花生蛋白的合理有效利用奠定基础。 关键词：花生；分离蛋白；碱提酸沉法；优化条件 花生的蛋白质含量为24％~36％，其中10％为清蛋白，90％为碱溶蛋白，由花生球蛋白和伴花生球蛋白两部分组成[1,2]。花生蛋白营养全面，含有人体必需的8种氨基酸，具有色泽浅，风味淡雅，抗营养因子含量低等特点，可作为—种极具开发潜力的蛋白基料和牛乳等动物奶类的替代品。花生蛋白优良的功能特性使其在食品、化工和医药等领域中的应用潜力巨大[3~5]。 目前，高纯度花生蛋白的制备技术并不成熟，极大地限制了花生蛋白的应用范围。作为一种经典的分离蛋白质的方法，碱提酸沉法可以用于高纯度花生蛋白的制取[6]。本文对碱提酸沉法分离花生蛋白的优化条件进行了研究，其结果不仅可为花生蛋白的合理有效利用奠定基础，而且可为植物蛋白的提取分离技术提供有价值的参考数据。 1 材料与方法 1.1 脱脂花生粕 由四川梓潼长业食品有限公司提供，蛋白质含量为51.96％。 1.2 主要试剂 酪蛋白（国外分装）纯度为99％，其它为国产分析纯试剂。 1.3 主要仪器 TU-1800PC型紫外可见分光光度计、PHS-2C酸度计、LD4-2A离心机等。 1.4 标准曲线的建立 配制不同浓度的酪蛋白标准溶液，分别于580nm波长处测定其吸光值[6, 7]，以酪蛋白浓度为横坐标，吸光值为纵坐标绘制标准曲线，如图1所示。采用最小二乘法拟合得标准曲线方程：y = 0.0005x + 0.0079， R2 = 0.9989。 1.5 花生分离蛋白的制备 将脱脂花生粕用温水浸泡，匀浆处理后用稀碱液浸提，经过滤或离心分离除去其中的不溶物，用盐酸调节浸提液pH值，离心分离后得到花生分离蛋白。 蛋白质浓度(μg /ml)＝溶液中蛋白质量(μg)/溶液体积(ml) 1.6 检测方法 水分含量按GB 10358-89/ISO 771-1977方法测定。 总灰分含量按GB 9824-88/UDC 665.117:543.06方法测定。 蛋白质含量采用Folin-酚法测定 [6~8]。 图1 酪蛋白标准曲线 2 结果与讨论 2.1 匀浆料液比的确定 在脱脂花生粕中加入一定量的水，其料液比(m/v)分别为1:8,1:6,1:4，待其充分溶胀后进行匀浆化处理，分别测定各匀浆液的固形物及蛋白质含量，结果如图2所示。可以看出，当料液比为1:8时，匀浆液的蛋白质含量最高。 2. 2 碱提条件的确定 正交试验结果（表1）显示，若以蛋白质含量为评价指标，影响因素依次为：BAC，最佳条件为A1B3C2，即pH7.8、60℃、2.5h ；若以浸提物得率为评价指标，影响因素依次为：ACB，最佳条件为A2B3C2，即pH8.2、60℃、2.0h；若以两者乘积的综合评定为评价指标，影响因素依次为：CA B，最佳条件为A2B3C2，即pH8.2、60℃、2.0h。 图2 不同料液比匀浆液的蛋白质含量 表1 正交试验结果分析表 组 别 浸提pH值 浸提温度 浸提时间 含量* (%) HL 得率** (%) DL 综合评定 ZH A (℃) B (h) C 1 7.8 50 1.5 66.79 78.21 0.5224 2 7.8 55 2.0 66.79 78.17 0.5221 3 7.8 60 2.5 69.49 78.38 0.5447 4 8.2 50 2.0 68.35 82.80 0.5660 5 8.2 55 2.5 66.23 80.27 0.5316 6 8.2 60 1.5 67.56 78.81 0.5324 7 8.6 50 2.5 65.41 77.08 0.5042 8 8.6 55 1.5 65.82 78.17 0.5145 9 8.6 60 2.0 67.75 81.15 0.5498 HL Ⅰ 2.0307 2.0055 2.0017 Ⅱ 2.0214 1.9884 2.0289 Ⅲ 1.9898 2.0480 2.0113 R 0.0410 0.0596 0.0272 DL Ⅰ 2.3476 2.3809 2.3519 Ⅱ 2.4188 2.3661 2.4212 Ⅲ 2.3640 2.3834 2.357