植物细胞工程－2实验室的建立与灭菌技术.pptVIP

植物细胞工程研究的基本设备和无菌操作 Content 实验室组成和基本设备 无菌操作 1.1 植物细胞工程实验室的组成 1.1 植物细胞工程实验室的组成 2.1 各种灭菌方法及其适用范围 2.2 无菌操作 具体消毒操作过程及技术 3 操作工具消毒:无菌操作;工具 4 操作者消毒 工作人员要洗手，再用70%乙醇擦净并穿上工作服，工作前可开紫外灯照射30min，工作时必须关上，以防止紫外线对人的伤害，切不可开着紫外灯作业。 5 培养基灭菌 微生物污染通常从开始培养时就存在。培养器皿要封好，防菌，然后再1.06kg/cm2（121℃）下15－40min。从达到要求的温度算起。灭菌取决于温度，不直接取决于压力。灭菌的时间随灭菌液体的容积而不同（表1）。 * * 第二章 洗涤室 需要备有鼓风干燥箱、落水架、工作台、水池、水桶、水盆、试管刷等，主要用于玻璃器皿、用具和培养材料清洗；还需要有高压水龙头用于冲洗。 灭菌室 需备有高压蒸汽灭菌设施，如直立式、卧式和手提式任何一种装置均可，主要用于固体培养基、器械等灭菌；细菌过滤器用于液体培养基灭菌；煤气灶或电炉等。 配制室 需备有冰箱、化学实验台、药品柜、器械柜、物品存放架以及各种玻璃器皿和用具，包括不同容积的容量瓶、烧杯、量筒、移液管、三角烧瓶、磨口瓶、广口平、试管、各种类型培养瓶、玻璃棒、移液管架。用于培养基母液配置和培养基配置。 无菌操作室 需备有超净工作台或接种箱、固定式载物台、移动式载物台、广口瓶、酒精灯、酒精棉、器械支架、手术剪解剖刀、解剖针、镊子灯，用于接种。 培养室 需备有制冷设备、控光设备、固定式培养架、旋转式培养架（转床）、旋转式摇床。适用于器官（芽、茎、花药）、愈伤组织、细胞和原生质体的固体或液体培养基。 鉴定室 需备有高倍显微镜、倒置显微镜、实体显微镜、恒温箱、切片机、恒温水浴、滴瓶、染色缸、载玻片、盖玻片等用于细胞学、组织学观察。 驯化移植室 需备有温室、弥雾装置、荫棚、移植床、钵、盆、塑料布、草炭、蛭石、粗沙等，用于试管小植株的锻炼和移植。 万分之一电子天平 酸 度 计 高压灭菌器 高压灭菌器 微 波 炉 恒温培养箱 磁力搅拌器 纯水系统 烘 箱 超低温冰箱 制冰机 无菌微孔过滤器 针筒式微孔溶剂滤膜过滤器 中型离心过滤器 无菌微孔过滤器 微型离心过滤器 恒温振荡摇床 移动载物台 人工气候箱 手持式基因枪 固定式基因枪 高速冷冻离心机 PCR 仪 open-roof greenhouse 接种室空气和台面，试管受精中用于花粉灭菌 紫外灯照射 照射灭菌 接种器械、瓶口、棉塞等 酒精灯烧灼 烧灼灭菌 培养材料表面 70～75％酒精、0.1~0.2%升汞（氯化汞）、10％次氯酸钠、漂白粉上清液、新洁尔灭等 药剂灭菌 液体培养基和蒸馏水 过滤灭菌器 过滤灭菌 接种室和培养室的空间灭菌 向甲醛内加入高锰酸钾的药液、乙二醇 熏蒸灭菌 培养基、蒸馏水、各种器械等 高压蒸汽灭菌锅 湿热灭菌法 各种玻璃器皿和器械 鼓风干燥箱（烘箱） 干热灭菌法 适用范围 方法 名称 清洗 灭菌 接种 玻璃器皿的清洗 实验材料的清洗 培养材料的灭菌 培养基灭菌 接种室(无菌操作室)的灭菌 接种台的灭菌 工作人员注意事项 消毒灭菌是植物生物技术成功的前提和关键 杜绝所有污染来源 Origin of contaminant A All culture vessels ； B Media； C Explants；D Environment； E Tool used for tissue culture； F 操作过程 G 操作者本身； H 超净台 1 操作室和培养室消毒灭菌: 保持清洁，定期熏蒸消毒，常用苯酚（3～5％）、甲醛（常用量为36%的甲醛25mL/m3）、3-5%来苏尔（煤酚 皂）溶液可用来擦洗培养架和地面。 操前先打开紫外灯照射对室内消毒。 2 超净工作台消毒: 防止在操作时的污染非常重要。 净化台表面用70－95%乙醇擦净，气流吹10－15min后才能开始工作。