狭义的克隆技术往往指核移植技术细胞核移植是指将早期胚胎.PPT

克 隆 技 术Clone Technology 安徽省立医院生殖医学中心 童先宏 Tong68xianhong@163.com 克隆来源于英语“clone”或“cloning”的音译，起源于希腊文“Klone”，原意是用“嫩枝”或“插条”繁殖。曾译为无性生殖或无性繁殖，即由同一个祖先细胞分裂而形成的纯细胞系，这个细胞系每个细胞的基因彼此是相同的。 （2） 随着分子生物学的发展，通过核移植与基因工程等技术也可获得无性系，于是人们把实现无性繁殖的操作称之为克隆，克隆由名词转化为动词。 克隆=复印 克隆羊多利（Dolly）的诞生 1997年2月，英国Roslin研究所宣布克隆羊多利（Dolly）的诞生揭示一个全新概念：由成年机体的一个体细胞核，可以复制一个基因完全相同的新生命个体。 是克隆技术的里程碑。 克隆一词变得家喻户晓 植 物 细 胞 克 隆 历史回顾（1） 1902年德国植物学家Haberland指出，植物的体细胞具有母体全部遗传信息，具有发育成完整个体的潜能，因而每个细胞都可像胚胎细胞那样，经离体培养再生成完整植株。 1958年Steward成功将一个胡萝卜细胞在试管中培养，长成一株具有根、茎、叶等器官的完整植株。 动物细胞克隆 动物细胞克隆 广义的动物克隆有：胚胎分割、卵裂球分离、孤雌激活、细胞核移植等， 狭义的克隆技术往往指:核移植技术 细胞核移植 是指将早期胚胎、胎儿或成体动物的细胞核移植到去核的卵母细胞中，重新组成重构胚并使之发育成成体动物的过程。 核移植分类 根据核供体细胞来源的不同 1.胚胎细胞的核移植 2.体细胞的核移植 根据供体细胞与受体细胞是否来源于同一种动物又可将其分为 1.同种核移植 2.异种核移植两类。 低等动物胚胎核移植技术 历史回顾（2） 1932年 Spemann提出设想：分化了的细胞核移入卵子中能否指导胚胎发育？ 1952年 Briggs和King在两栖动物证实了Spemann提出设想 1955年 他们获得了一只蝌蚪的细胞创造了与原版完全一样的复制品。小小的蝌蚪改写了生物技术发展史 1961年，我国科学家童第周等以金鱼和螃蜱鱼为材料，进行鱼类不同亚科细胞核移植获得成功，同时进行了细胞质对细胞核的影响的研究。 在1978年著名生物学家童第周成功地进行了黑斑蛙的克隆试验，他将黑斑蛙的红细胞的核移入事先除去了核的黑斑蛙卵中，这种换核卵最后长成能在水中自由游泳的蝌蚪。 哺乳动物胚胎细胞核移植技术 胚胎细胞核移植技术 胚胎细胞核移植 (embryo cell unclear transplantation)技术。将一个早期胚胎的细胞核移植到去核的卵母细胞中，构建新合子的生物技术，通常将提供细胞核的细胞称为供体，接受细胞核的卵母细胞称为受体。 历史回顾（3） 1981年，瑞士日内瓦大学的伊尔门泽、美国杰克逊实验室，首次对小鼠卵进行核移植获得成功。 此后，胚胎细胞的核移植在多种动物上获得了克隆后代，如绵羊(Willadsen等,1986),牛(Prather等,1987),兔(Stice等,1988),猪(Prather等,1989),山羊(张勇等,1991)等。 直到1997年才由 Meng et al成功地克隆出两只猴,这是灵长类动物的首次被克隆。 直至此时,核移植所用的供体细胞均为囊胚阶段以前的胚胎细胞。当时人们普遍认为，早期胚胎尚具有全能性，到囊胚以后则随着分化而逐渐丧失其全能性。 个体发生、发育 一个精子和一个卵子的结合（即受精），恢复二倍体，从而开始了一个个体的发育。在胚胎发育过程中，很多不同类型的细胞都是由受精卵发育开始的。它们有一些专门发育为肌肉细胞，有一些发育为神经细胞，还有发育为血细胞等。 问 题 在哺乳动物胚胎发育过程中，细胞发生了分化，但是在适宜环境下，已分化的细胞能否重新恢复到发育的起始状态，再重新发育成其它类型细胞组织的多能性，甚至发育成完整个体的全能性呢？细胞的分化是不是发生了不可逆的变化？ 哺乳动物体细胞核移植技术 动物克隆技术的里程碑 体细胞核移植技术(somatic cell unclear transplantation) 将分化程度较高的体细胞移植入去核的卵母细胞中构建新合子的生物技术。 历史回顾（4） 1996年，世界第一例从成年动物细胞克隆出的哺乳动物绵羊多利诞生。这个秘密直到1997年2月才向世人公布。 1997年7月，使用在实验室内培养产生并植入了一个人类基因的绵羊体细胞