单基因座探针-昆明医科大学.PPT

许冰莹, Tel:0871Email:bingying_xu@126.com; ;1983年（琳达），1986年（多恩）被强奸杀害案;Examples of DNA in the News;第四章 DNA长度多态性（DNA length polymorphism) ;教学内容和目的要求：;第四章 DNA长度多态性;＊二.概念（Concept） 同一基因座上各等位基因之间DNA片段长度差异构成的多态性。;＊三.用于进行DNA长度多态性分析的遗传标记：二类; ; ;DNA指纹（DNA fingerprint）;第四章 DNA长度多态性(DNA length polymorphism);一.概述（summary） 限制性片段长度多态性概念： （restriction fragment length polymporphism, RFLP） ;一.概述（summary）;限制性片段长度多态性 （restriction fragment length polymporphism, RFLP） ;重复单位长度 15-30bp，序列总长度约100bp-20kb。 人基因组DNA中小卫星DNA重复单位的核心序列有高度的同源性. ;（二）限制性内切酶(restriction endonuclease，RE) ;Alu I;生物学功能： 打击异己，保护自身。 降解外来侵入的DNA而不降解自身细胞的中的DNA。 因为自身DNA的酶切位点经甲基化修饰（修饰酶）而受到保护。 ; 当用限制酶切割VNTR区时，酶切点在VNTR区的两个侧翼，就会得到各种长度不同的片段。;特点：1.能识别双链DNA上的特定位点，将DNA 的双链切断。 2.在人类基因组DNA中有许多的酶切点, 消化过程中所有的识别点同时被切 断，人类基因组DNA被切成许多长短不 同的DNA片段。;;（三）分子探针 （ Molecular probe ）;;（三）分子探针（ Molecular probe ）;DNA纹印（DNA profile）——单基因座VNTR ;; 将人类基因组DNA用限制性内切酶切割成不同长度的限制性片段，经电泳分离，印迹转移，用多基因座探针杂交后，获得了由多个基因座上的等位基因组成的片段长度不等的图谱，这种图谱具有高度的个体特异性，就像人类的指纹一样，故称为“ DNA指纹” （DNA fingerprint） 。;;（三）分子探针（ Molecular probe ）;三.分子探针（ Molecular probe ）;;二.限制性片段长度多态性（restriction fragment length polymporphism, RFLP） ;DNA指纹基本原理 ＊; DNA指纹的基本技术 （Basic technology of DNA fingerprint）;限制性酶切;;（一）基因组DNA的提取、纯化与???量 （Genomic DNA extraction, purification and quantitative）;DNA提取常用方法;2.基因组DNA的纯化(Genomic DNA purification );2.基因组DNA的纯化(Genomic DNA purification );3. DNA的定量（Genomic DNA quantitative）;（二）限制性核酸内切酶消化 (restriction endonuclease digestion);人类的基因组很大，不切割无法分析其中的基因。限制酶能把基因组在特异的部位切开，得到一组长度各异的片段 。 ;（三）电泳 electrophoresis;琼脂糖凝胶电泳;;（四）印迹转移（ blotting）;DNA is transferred to nitrocellulose;;根据探针的特异性探针分二类：;Renaturation driven by homologous base pairing;探针只能与待测序列按碱基互补结合，结合是特异的;（五）分子杂交 （hybriding）;;杂交;二.DNA指纹图谱在法医学应用;;;;;DNA, the Law, and Many Other Applications – The Technology of DNA Fingerprinting;;父 子 母;;1.检测灵敏度低。一次DNA指纹鉴定需要0.5～1.0μg基因组DNA，这相当于25μl 血液，5μl 精斑，0.5～1.0μg 组织或 15 根新拔除的头