培养液及缓冲液之制备1LBLuria-Bertaini培养基每公升含下列.PDFVIP

二、培養液及緩衝液之製備： 1. LB（Luria-Bertaini）培養基每公升含下列成分： 10 g Bacto-tryptone、5 g Bacto-yeast extract、5 g NaCl ，以NaOH 調至pH 7.5 後，再高壓滅菌。 2. LB plate： 每公升的LB 培養基中加入 15 g Bacto-agar 後，以NaOH 調至pH 7.5，再 高壓滅菌。於培養基凝固前，在每個培養皿 （100 mm petri-dish） 倒入 約2.5 ml 的培養基。洋菜膠凝固後，可於4 ℃可保存約一個月。 3. LB plate with ampicillin： 每公升的LB 培養基加入 15 gBacto-agar，以NaOH 調至pH 7.5 後，再高 壓滅菌。在溫度降至 55 °C 後，加入 ampicillin 使其最後濃度成為 50 µg/ml，搖勻後倒入培養皿中。洋菜膠凝固後，在4 ℃可保存一個月。 4.蛋白質電泳所使用的電泳緩衝液： MES SDS running buffer （MES，pH 7.2、Tris base、SDS、EDTA ） 5.3x SDSloading sample buffer： 150 mM Tris-HCl （pH 6.8）、300 mM DTT、6 % SDS、0.2 % bromophenol blue、30 % glycerol。 7.2 x YTmedium： 每公升含下列成分：16 g bactotryptone、10 g yeast extract、 5 g NaCl 以 NaOH 調至pH 7.5 後，高壓滅菌。 8.FSB buffer： 7 10 mM potassium acetate （pH 7.5）、 45 mM MnCl ．4H2O、 2 10 mM CaCl2．2H2O、100 mM KCl、3 mM hexaminecobalt chloride、10% glycerol 9.DnD solution： 0.53 g dithiothreitol、9 ml DMSO、1 M KOAc（pH 7.5）100 µl，最後加水 至 10 ml。 10.定位突變反應所使用的緩衝液： 10 x 黏合緩衝液：200 mM Tris-HCl（pH 7.5）、20 mM MgCl2、500 mM NaCl。 10 x DNA 合成緩衝液：75 mM Tris-HCl（pH 7.5）、4 mM dNTPs(each)、 37.5 mM MgCl2、7.5 mM ATP、5 mM DTT。 12.質體的純化的溶液 溶液І：50 mM glucose、25 mM Tris-HCl（pH 8.0）、10 mM EDTA （pH 8.0），最後高壓滅菌。 溶液П：200 mM NaOH 及 1 ﹪SDS 輕攪拌，以免產生氣泡。 溶液III：147.2 g KOAc 及57.5 ml HOAc，加去離子水至500 ml。 11.管柱的緩衝液 （1）Q-Sepharose 管柱 緩衝液A：30 mM Tris-Cl（pH 7.4）、2 mM β-mercaptoethanol、3 mM MgCl、0.2 mM EDTA （2）5’-ATP agarose 管柱 8 緩衝液B：30 mM Tris-Cl（pH 7.4）、2 mM β-mercaptoethanol、3 mM MgCl 、0.2 mM EDTA、1 mM MnCl 、2 mM fumarate 2 2 9