试验四菌落与细菌的观察目的自然界中存在着数目繁多及种类多样.PDFVIP

微生物學實驗 實驗四 菌落與細菌的觀察 一、目的 自然界中存在著數目繁多及種類多樣之微生物，經由單一個細菌分裂，培養 繁殖而形成的細菌族群稱為菌落 (colony) 。本實驗使用顯微鏡觀察不同種類的細菌 所形成的菌落形態，包括菌落的大小、顏色、氣味、表面光滑或粗糙、邊緣平整 或呈鋸齒狀，是否有黏液。 二、原理 微生物經由培養分離出單一菌落，藉由其外形 (morphology) 、培養特徵 (cultural characteristics) 和生理生化特性 (physiology characteristics) 的不同，將微 生物進行初步的鑑定分類。而固態培養基的菌落觀察包括了形狀 (shape) 、大小 (size) 、顏色 (color) 、邊緣的形態、凸起的形狀及程度、透光率 (opacity) 、表面形 態、固定性 (consistency) 、溶解性 (emulsifiability) 、氣味 (odour) 和生長量等，本 實驗將利用表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) 、大腸桿菌(Escherichia coli) 以及擬態弧菌( Vibrio mimicus)三種不同微生物之培養液，以接種環取出菌液，於顯 微鏡下觀察細胞形態並且平舖塗抹在營養固態瓊脂培養基 (Nutrient broth agar)和 TCBS 瓊脂培養基 (Thiosulfate-Citrate-Bile salt-Sucrose agar) ，經過37 ℃隔夜培養 後，觀察菌落的各種特性。 3-1 第三章 微生物形態學與觀察 三、材料與設備 (一) 材料 1. 球菌：表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis) 2. 桿菌：大腸桿菌(Escherichia coli) 3. 弧菌：擬態弧菌( Vibrio mimicus) 4. 無菌稀釋水 5. 營養固態瓊脂培養基(Peptone 10 g 、Beef extract 5 g 、NaCl 2 g 和 agar 15 g) 6. TCBS 瓊脂培養基(Yeast extract 5 g 、Proteose peptone 10 g 、Sodium citrate 10 g 、Sodium thiosulfate 10 g 、Oxgall 8 g 、Saccharose 20 g 、Sodium chloride 10 g 、Ferric ammonium citrate 1 g 、Bromthymol blue 0.04 g 、Thymol blue 0.04 g 和 agar 15 g) 7. 15 ml 試管 8. 拭鏡紙 9. 載玻片 10. 蓋玻片 11. 接種環 12. L 型玻棒 13. 酒精燈 14. 牙籤 (二) 設備 1. 顯微鏡 2. 37 ℃培養箱 3. 旋轉式試管組織培養器 3-2 微生物學實驗 四、方法與步驟 1. 製作不含任何抗生素且滅菌過的營養固態瓊脂培養基和 TCBS 瓊脂培養 基。 2. 使用 L 型玻棒分別平舖塗抹表皮葡萄球菌、大腸桿菌在營養固態瓊脂培養 基和擬態弧菌在 TCBS 瓊脂培養基。 3. 37 ℃隔夜孵育後，觀察菌落的特性並且繪圖。 4. 使用牙籤挑起固態瓊脂培養基的單一菌落，培養在 15 ml 液態培養基試管 中，37 ℃旋轉孵育到隔夜。 5. 用接種環以酒精燈過火滅菌，冷卻後沾取含菌液態培養基。 6. 均勻塗抹滴有無菌稀釋水之載玻片上。 7.