[基础医学]信号转导的核酸分子基础.ppt

信号转导的核酸分子基础 一、核酸的组成与结构 (一）核苷酸 稀有碱基 真核生物DNA特点 1. 基因组DNA与蛋白质结合成染色体，存于细胞核，（除配子细胞外，体细胞内的基因组是双份的，即双倍体,diploid）有两份同源的基因组。 （四）RNA的结构 ★（二）核酸的提取、分离和纯化 1.DNA的提取分离 （1）苯酚法（常用） 苯酚作为蛋白变性剂,同时抑制了DNase的降解作用。 (2) CTAB 法 (3)三氯甲烷法 1.三氯甲烷-戊醇除蛋白（中间层） 2.水相提取DNA 3.三氯甲烷-戊醇再除蛋白 4.水相再提取DNA（至无蛋白凝胶） (4)酶法 蛋白酶除蛋白 核酸酶除RNA 提纯DNA 2.RNA的提取分离 （1）Trizol法（异硫氰酸胍苯酚混合液相提取法） 异硫氰酸胍裂解细胞→核蛋白体分离→RNA释放到水相 RNA分布 三、核酸含量测定的原理 （一）定磷法P：9.4%~9.6% （二）定糖法 1.核糖 2.脱氧核糖 （三）紫外吸收法 （四）环核苷酸的检测 第六节 信号转导的脂类分子基础  血浆脂蛋白 组成：蛋白质、甘油三酯、磷脂、胆固醇及其酯 磷脂是指含磷酸的脂类  原料：脂酸、甘油 胆碱、丝氨酸、肌醇、磷酸盐 丝氨酸 乙醇胺 胆碱 CO2 3 SAM（S-腺苷甲硫氨酸） 部位： 内质网 2.CDP-甘油二酯合成途径（心磷脂、磷脂酰肌醇） （三）甘油磷脂的降解 （四）鞘磷脂 三、脂类第二信使及分析 2.DAG测定 （1） 向培养的MΦ中加入3H-甘油 （2） 置5% CO2 95%空气孵箱中37℃孵育48h； （3）加入不同剂量的药物刺激一定时间，然后用氯仿/甲酸(v/v,2∶1)终止反应并溶解细胞，并加入2mol/L KCl,1000g离心10min，加样到薄层层析板上，用氯仿/丙酮(24∶1，v/v)展开，室温干燥，放入碘蒸汽中着色，同标准品比较，确定DAG的位置，然后刮取这一组分进行液闪计数。对照组不加药物，以RPMI-1640培养液代。 （2）硅胶膜特异性吸附离心柱提取法 异硫氰酸胍裂解细胞→抑制RNA酶→RNA释放→硅胶特异性吸附RNA →除去蛋白质和DNA →低盐洗脱RNA 1.竞争性蛋白结合法测cAMP （125I－cAMP放免试剂盒 ） 2.放射性免疫法测细胞内cGMP浓度 脂肪酸 (fatty acids) 脂肪(fat) 甘油三酯(动物) 油(植物源) 类脂(lipids) 磷脂 固醇及其酯 相关化合物 脂类 三酰甘油 甘油磷脂 (phosphoglyceride) 胆固醇酯 FA 胆固醇 FA FA FA 甘油 FA FA Pi X 甘油 X=胆碱、水、乙醇胺、丝氨酸、甘油、肌醇、磷脂酰甘油等。 一、脂类基本构成： 1. 维持生物膜的结构和功能 2. 胆固醇可转变成类固醇激素、维生素、胆汁酸等 3. 构成血浆脂蛋白 生物膜、 神经、 血浆 5﹪ 类脂 糖酯、胆固醇及其酯、磷脂 1. 储脂供能 2. 提供必需脂酸 3. 促脂溶性维生素吸收 4. 热垫作用 5. 保护垫作用 6. 构成血浆脂蛋白 脂肪组织、血浆 95﹪ 脂肪 三酰甘油 生理功能 分布 含量 分类 脂类的分类、含量、分布及生理功能 脂类的生理功能 内核： 甘油三酯 胆固醇酯 中性脂类 apoB100 20~25% 含胆固醇及其酯最多，40~50% 1.006~1.063 LDL 最多，约50% 5~10% 最少, 1% 蛋白质 脂类 apo AⅠ、 AⅡ apoB100、CⅠ、CⅡ CⅢ、 E apoB48、E AⅠ、AⅡ AⅣ、CⅠ CⅡ、CⅢ 载脂蛋白组成 含脂类50% 含TG 50~70% 含TG最多， 80~90% 组 成 1.063~1.210 0.95~1.006 ＜0.95 密度 HDL VLDL CM 二、磷脂 甘油磷脂：由甘油构成的磷酯（体内含量最多） 鞘磷脂：由鞘氨醇构成的磷脂 X指与磷酸羟基相连的取代基，包括胆碱、水、乙醇胺、丝氨酸、甘油、肌醇、磷脂酰甘油等。 FA FA Pi X 甘油 FA Pi X 鞘氨醇 胆碱 鞘氨醇 1 1 鞘磷脂 胆碱、乙醇胺、丝氨酸、肌醇等 甘油 2 1 甘油磷脂 其他成分 醇类 脂酸 磷酸 不同或不尽相同的组成成份 相同的组成成份(分子数) 甘油磷脂与鞘磷脂的分子组成 （一）甘油磷脂 组成：甘油、脂酸、磷脂、含氮化合物 结构： 功能：含一个极性头、两条疏