生物化学——第二章节核酸幻灯片.pptVIP

三、核酸的水解 1、酸碱水解 酸解：嘌呤糖苷键嘧啶糖苷键 磷酸酯键； （从易 难） 碱解：RNA稀碱条件下降解，而DNA则不被降解；DNA比RNA耐碱。 2、核酸的酶解 核酸水解酶：催化水解多聚核苷酸链中的磷酸二酯键。 根据底物分：DNase和RNase 根据作用方式分：核酸外切酶和核酸内切酶。 核酸外切酶：从多聚核苷酸链的3’-端或5’-端开始，逐个水解切除核苷酸； 核酸内切酶：从多聚核苷酸链中间某个位点开始切断磷酸二酯键。其中限制性核酸内切酶特异性地水解核酸中某些特定碱基顺序部位。 四、核酸的变性、复性及杂交 1、变性（denaturation）：高温、酸、碱及某些变性剂（如尿素）能破坏核酸中的氢键，使有规律的螺旋型结构变成单链的、无规律的“线团”，此作用称为核酸的变性。 蛋白质： 高级结构 松散肽链 变性 （变性不涉及肽键） 核酸： 螺旋结构 无规则线团 变性 （变性不涉及磷酸二脂键的断裂 ） DNA的变性过程 加热 部分双螺旋解开 无规则线团 链内碱基配对 2、变性重要特征——判断变性的标志 紫外吸收值急剧增加——增色效应 粘度下降，比旋下降 生物活性丧失 结构松散，容易被酶解 核酸变性的因素: 温度升高、酸碱度改变、甲醛和尿素等的存在均可引起核酸的变性。 3、DNA的热变性 DNA的变性过程是突变性的，它在很窄的温度区间内完成。因此，通常将引起DNA变性的温度称为“熔点”或“解链温度”，用Tm表示，在此温度可得到紫外吸收最大变化值的一半。（双螺旋结构失去一半时）。 Tm值是DNA的一个特征常数 Poly d(A-T) DNA Poly d(G-C) 某些DNA的Tm值 60 80 100 1 .0 1 .4 1 .2 100% A260 t \ 0C Tm Tm Tm 1 2 3 1 3 2 影响Tm值的因素 : DNA的Tm值与分子中的G和C的含量有关。 （G+C)%=(Tm-69.3)*2.44 介质的离子强度:DNA的应保存在含盐的缓冲液中， 离子强度较低的介质Tm较低 溶液的pH值：高pH下广泛去质子而丧失形成氢键的能 力，pH大于11.3时，DNA完全变性。 变性剂：尿素、甲醛等破坏氢键，妨碍碱基堆积，使 Tm下降。 4、复性 DNA热变性在一定条件下是可逆的，DNA水溶液加热变性时，双螺旋的两条链分开，如果将溶液缓慢冷却，则两条链可能发生特异的重组而恢复成双螺旋，这种现象称“退火”（annealing），这种双螺旋的重组过程称复性。 ? 高温变性 缓慢冷却 热复性 急速冷却 复性失败 核酸的复性 紫外吸收值A260降低（减色效应） 复性的特征 比旋上升，粘度上升。 生物活性部分恢复。 温度要逐步降低， 变性DNA浓度高， 影响复性因素 DNA片断大则复性就慢， 具有很多重复序列的DNA复性也快 5、核酸的分子杂交(hybridization) 定义：不同核酸单链通过碱基配对形成杂交分子的过程。 分子杂交不仅可以在不同来源的DNA片段中形成，甚至可以在DNA和RNA之间也可以形成DNA—RNA杂交分子。 第二节 DNA的结构 一、核酸的一级结构 定义：指核酸上的核苷酸排列顺序。 (核苷酸相当于氨基酸、单糖的角色） 连接键：3’，5’-磷酸二酯键 骨架：多核苷酸的主链是戊糖和磷酸构成的 走向：5’ 3’ 脱H2O 脂键相连 3`，5`-磷酸二酯键 首 尾 3` 5` T T T 核 苷 酸 的 一 级 结 构 核酸一级结构的简写形式 线条式缩写 戊糖 3`-OH 5`-磷酸 P A 核苷酸 5` 3` 首端 末端 P P P P P P T C T A G C OH pApCpGpTpAOH pA-C-G-T-AOH pA·C·G·T·AOH pACGTAOH 二、DNA分子的结构 1、DNA的碱基组成 Cha