第三版链霉菌室操作手册.pdfVIP

链霉菌室实验操作手册（2003 年） 第一章 培养基 抗生素 生长因子 3 常用抗生素及其使用浓度3 LB （Luria-Bertani ）培养基3 LA 3 基本培养基（MM ）3 R5 （1L）链霉菌原生质体转化时用4 YEME(酵母膏-麦芽膏培养基) 1L （液体培养链霉菌）4 TSBY （1L）（液体培养链霉菌）4 MS 培养基5 2CMY 培养基（用于井岗的接合转移）5 YMS 培养基 （阿维，井岗产孢）5 YD 培养基5 生长因子补充物的使用浓度6 第二章 DNA 基本操作 7 大肠杆菌质粒的抽提7 酶连反应7 DNA 片段凝胶回收8 DNA 纯化9 E.coil 总DNA 的提取9 链霉菌质粒DNA 的小量提取（还需改进） 10 去磷酸化处理（详见分子克隆实验指南以及Takara 的CIAP 使用说明） 10 AT 克隆（详见说明书） 10 Southern Blot 11 第三章 PCR 及相关技术 13 PCR 13 PCR 重组（详见《PCR 技术实验指南》p429 重叠延伸技术） 14 PCR 定点诱变（DpnI 法） 14 第四章 基因片段转移技术 15 大肠杆菌CaCl 法制备感受态细胞及DNA 转化 15 2 DNA 转化 15 大肠杆菌质粒的快速检测 15 接合转移（详见英文《手册》249 页） 16 链霉菌原生质体的制备 16 链霉菌原生质体的转化 17 PCR-Targeting 技术中E.coli 电转化感受态的制备及电转化 17 第五章 RNA 操作技术 19 链霉菌总RNA 的抽提 19 1 链霉菌的RT-PCR （promega RT kit ） 19 第六章 蛋白质基本操作技术 21 SDS，考马斯亮蓝染色21 大肠杆菌可溶性蛋白表达及抽提（用于由IPTG 诱导的表达体系）：21 链霉菌总蛋白抽提：22 大肠杆菌目标蛋白的诱导及总蛋白检测（含T7 表达系统如BL21 菌株中的pET 系列表 达体系）：22 Western Blot 23 第七章 遗传作图相关技术 25 链霉菌孢子悬液的制备25 链霉菌中NF 的证明25 孢子杂交25 在遗传图谱上两个标记基因之间定位新的基因25 第八章 其他技术 27 链霉菌菌种保藏27 检测链霉菌淀粉酶的活性27 2 第一章 培养基 抗生素 生长因子 常用抗生素及其使用浓度 使用终浓度（μ g/ml ） 贮藏液浓度 抗生素 英文名称及缩写 抗性基因 链霉菌 大肠杆菌