NPT域蛋白质在转基因水稻中的表达特征研究-生物化学与生物物理进展.PDFVIP

生物化学与生物物理进展 Progress in Biochemistry and Biop hys ics 2015, 42(3): 268~276 NPT 白质在转基因水稻中的表达特征研究* 1)** 2)** 1) 1) 2) 1) 2) 兰金苹 武鹏程 郭美岑 史佳楠 韦汉福 荣瑞娟 郝育杰 1) 1) 1) 3) 3) 2)*** 1)*** 杨 烁 白影影 李莉云 吴 琳 刘斯奇 尹长城 刘国振 1) 2) ( 北农业大学生命科学学院，保定07 1001； 北京华大蛋白质研发中心有限公司，北京10 13 18； 3) 中国科学院北京基因组研究所，北京 100 10 1) 摘要 npt 编码新霉素磷酸转移酶，是转基因实验中最常用的筛选标记基因之一 本研究中，表达了重组新霉素磷酸转 移酶(NPT )蛋白质，制备了单克隆抗体，建立了用免疫印迹检测转基因水稻中NPT 蛋白质的方法，调查了NPT 蛋白质 的表达特征，包括遗传特征、表达时空特征、表达丰度和亚细 定位等 结果表明，该方法可检测到单粒稻米的0.25%(约 0.025 mg)样品中的NPT 蛋白质，NPT 的表达符合显性遗传规律，根据NPT 的表达可对转基因T1 代种子进行阴阳性及 纯合株系的鉴定，对T1 幼苗中NPT 丰度的分析可为纯合单株的鉴定提供参考信息 定量分析表明苗期叶片中NPT 蛋白 质的含量约为鲜重的0.08 在CaMV-35S 启动子驱动下NPT 蛋白质在水稻苗期、成株期的叶片和根部组织中表达量较 高，而在分蘖期、孕穗期较低，NPT 在不同时期的根、茎、叶、穗子、花及种子等组织中均有表达，只是在分蘖节、茎 节、穗轴和花药等组织中表达量相对较低 此外，NPT 蛋白质的表达主要定位在细 质中 综上所述，本研究建立了具有 应用价值的检测NPT 蛋白质的免疫印记方法并系统揭示了其在水稻中的表达特征 关键词 转基因水稻，CaMV-35S 启动子，NPT 蛋白质，免疫印迹技术 学科分类号 Q7 ，Q81，Q816，S511，Q51 DOI: 10.16476/j.pibb.20 14.0376 npt 是植 遗传转化中最常用的筛选标记基 的影响，转基因已经从实验室中的概念成为现实， 因之一，来自大肠杆菌转座子Tn5 上的aph 基 其推广应用引起了社会的广泛关注 据统计，全世 因 ， 编码 新 霉素 磷 酸转移酶 (neomycin 界种植的转基因作 每年都以较高的速率递增[9] phosphotransferase ，NPT )[1] NPT 可使ATP 在转基因植 的基础研究和应用领域都离不开高灵 分子上的 磷酸基转移到抗生素分子上，从而影响 敏度、高特异性的检测方法[10] 针对外源DNA 以 酌 抗生素与核糖体亚基的结合，使氨基糖苷类抗生素 PCR 为核心的检测方法具有极高的灵敏度，也已 (如G418 、卡那霉素、巴龙霉素和新霉素等) 因磷 被广泛采用，但PCR 对实验要求比较高，且只能 酸化而失活 这样，带有npt 基因的植 可以在 确定转基因样品是否含有外源DN