微生物学检验细菌形态学检查法参考.pptVIP

细菌形态学检查 细菌的显微镜检查 显微镜：光学显微镜 所用放大倍数：10×100＝1000 所用镜头：油镜头 镜油：香柏油或石蜡油 香柏油折光率（n＝1.515）与玻片折光率（n＝1.52）接近 显微镜使用完毕须擦拭镜头。 不染色标本检查 应用：主要用于观察活菌的动力和运动方式 常用方法：压滴法、悬滴法、暗视野映光法 压滴法 悬滴法 染色标本的检查 染色方法的种类 单染法:采用一种染料染色 复染法（鉴别染色）:采用两种或两种以上的不同染料进行先后染色，使不同种类的细菌、同种细菌的不同结构，分别染上不同的颜色，以便鉴别细菌。 染色标本检查的基本程序 涂片－→干燥－→固定－→染色 ★涂片方式 ★干燥的方法 ★固定的方法、目的 ★染料种类：碱性染料、酸性染料、中性染料，碱性染料最常用 复染法基本程序 初染－→媒染－→脱色－→复染 革兰染色法（Gram染色） 染液组成： 结晶紫染液、卢戈碘液、95％乙醇、稀释复红 染色方法： 革兰染色结果 紫色－－革兰阳性菌 红色－－革兰阴性菌 染色结果图 染色原理 ★渗透学说：与肽聚糖结构有关 ★化学学说：与细菌细胞质中核糖核酸镁盐有关 ★等电点学说：与细菌所带电荷有关 革兰染色意义 ★有助于鉴别细菌 ★有助于选择用药 ★有助于了解细菌的致病性 影响革兰染色的因素 操作因素 ★涂片的厚薄 ★脱色时间的长短 染液因素 ★卢戈碘液放置时间过长 ★ 95％乙醇挥发 ★结晶紫与草酸铵混合时间太长 细菌因素： ★细菌种类、 ★细菌菌龄 抗酸染色 用于区别抗酸菌与非抗酸菌 细菌特殊染色 负染色法 细菌的培养与分离技术 培养基 常用玻璃器材的准备 培养基的成分和作用 培养基的种类 培养基的制备 常用玻璃器材的准备 玻璃器材的种类及用途 玻璃器材的清洗 ★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡－→清水清洗 ★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷－→清水清洗 细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷 ★盛培养基试管和平皿：高压灭菌－→趁热倒出－→洗涤剂洗刷－→清水冲洗 ★吸管：3％来苏浸泡－→清水冲洗 ★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡－→清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤 ★含油脂的器皿：单独灭菌 玻璃器皿灭菌前的准备 玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。 培养基的成分和作用 培养基：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。 营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类 水 凝固剂：琼脂、明胶 抑制剂 指示剂 培养基的种类（按用途分类） 基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板 营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板 鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA） 选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板 增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤。 厌氧培养基：用于培养厌氧菌 培养基的种类（按物理性状分类） 液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。 半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。 固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。 培养基制备的一般程序 培养基pH测定及矫正 材料： 待测培养基、 pH7.4标准比色管、4孔比色架、0.02％酚红、 氢氧化钠0.1mol/L、1mol/L） 盐酸（0.1mol/L、1mol/L） 蒸馏水 试管（与比色管口径一致）、 刻度吸管（5ml、1ml、0.5ml、0.25ml）、 pH矫正 pH矫正 计 算 假设2ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L NaOH 0.12ml，现有培养基1000ml，求需加NaOH的量。 细菌的接种与培养 无菌技术 细菌检验的操作需在无菌室或超净工作台内进行。 无菌室、超净工作台使用前后需进行消毒。 细菌检验使用的物品使用前后需严格灭菌 标本的采集 无菌试管、烧瓶的使用 细菌接种的基本程序 细菌接种法 平板划线接种法： ★目的：使混合的细菌呈单个分散生长，形成单个菌落，以便获得纯菌。 ★方法： ★分区划线法：适用于含菌量较多的标本 ★连续划线法：适用于含菌量较少的标本 液体培养基接种法 穿刺接种法 :用于观察细菌动力 斜面接种法 倾注培养法:用于细菌计数 分区划线法 连续划线法 细菌培养法 一般培养（需氧培养）： ★培养温度：35℃（采用恒温培养箱） ★培养时间：18～24h 二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培养箱 厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等 细菌在固体培养基中的生长现象 菌落 ★定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集