绿色荧光蛋白报告基因与ZNF580基因重组真核表达载体的构建与鉴定.PDFVIP

武警医学院学报 第 14 卷第 1 期 2005 年 1 月 ·8 · 　 　 Acta Academiae Medicinae CPAPF Vol 14 　No 1 Jan. 2005 论著 绿色荧光蛋白报告基因与 ZNF580 基因重组真核表达载 体的构建与鉴定 张文成 , 扎拉嘎胡 , 陈 　莉 , 买 　霞 (武警医学院细胞生物学与医学遗传学教研室 , 天津 300162) 摘　要 : 　【目的】构建具有绿色荧光蛋白报告 ( GFP) 基因的 ZNF580 真核表达载体 , 为转染细胞提供基础。 【方法】根据 ZNF580cDNA 序列的开读框架设计上、下游引物 , 利用 PCR 技术扩增 ZNF580 cDNA 开放阅读框序 列 , 将 PCR 目的片段与PGEMT 载体连接并克隆 , 酶切含目的片段 PGEMT 质粒及p EGFPC1 载体 , 回收纯化 后做定向克隆连接 , Bgl Ⅱ及Hind Ⅲ双酶切电泳筛选、鉴定并测序。【结果】酶切 p EGFPC1ZNF580 , 电泳分析 插入片段长度为 : 524 bp , 与预期的结果一致 , 经连接点两端进行测序 , 测序结果显示接头两端序列连接正确。 【结论】成功构建真核表达载体 p EGFPC1ZNF580 。 关键词 : ZNF580 ; 真核表达载体 ; 绿色荧光蛋白 ( ) 【文章编号】 2005 　 【中图分类号】　Q786 　 【文献标识码】　A Construction and identif ication of eukaryotic cell expression vector for green fluores cence protein reportor gene f used with ZNF580 ZHANG Wencheng , ZALA Gahu, CHEN Li , MAI Xia ( Department of Cytology and Medical Genetics , Medical College of Chinese People′s Armed Police Force , Tianjin 300162 , China) Abstract : 【Objective 】To construct an eukaryotic expression plasmid which has a green fluorescent protein reporter gene for exploring the role of human ZNF580 gene in invitro cell cultivation. 【Methods】The primers were designed accord ing to the open reading frame of ZNF580 gene cDNA , the PCR products was cloned into p GEMT vector. Then it was inserted to plasmid p EGFPCl (enhanced green fluorescent protein) . 【Results】Restricted enzymes analysis and DNA se quencing showed that the sequence of the recombinant plasmid p EGFPClZNF580 was correct. 【