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免疫学检测与防治 天津医科大学免疫学教研室 免疫学诊断 目的要求 （一）掌握抗原抗体反应的原理；凝集反应、沉淀反应与免疫标记技术的原理和应用。 （二）熟悉淋巴细胞的分离与类型鉴定的方法；T细胞功能测定的方法。 （三）了解B细胞功能测定；吞噬细胞功能测定。 二、教学内容 （一）抗原抗体检测的原理及方法 （二）免疫细胞的检测 （三）免疫学检测方法的应用 免疫学防治 目的要求 （一）掌握人工主动免疫和被动免疫的概念和特点。 （二）了解疫苗的基本要求及其发展；免疫治疗原理与方法；常用的生物制品及其应用原则。 二、教学内容 （一）免疫预防 （二）免疫治疗 免疫学诊断 免疫学检测技术已成为当今生命科学主要的研究手段之一，为基础和临床医学的发展以及疾病的诊断、预后判断、防治和药物疗效评价提供了重要的方法和手段。 一、抗原或抗体的检测 （一）抗原抗体反应的原理 抗原与抗体反应的物质基础是抗原的抗原表位与抗体的可变区之间的相互结合。 抗原抗体反应的特点 高度特异性 表面化学基团之间的可逆结合 适宜的浓度和比例 抗原抗体反应的两个阶段 抗原与抗体反应的体系中，若两者的浓度和比例适当，则形成的抗原抗体复合物体积大、数量多，出现肉眼可见的反应。 抗原抗体反应的影响因素 电解质 温度 酸碱度 （二）抗原或抗体的检测方法 1、凝集反应（agglutination reaction） 细菌、细胞等颗粒性抗原或表面包被有抗原的颗粒状物质（如聚苯乙烯乳胶等）与相应的抗体在电解质存在的条件下结合，出现肉眼可见的凝集团现象，称为凝集反应。 凝集反应可分为： 直接凝集 可分为：玻片法（菌种鉴定、ABO血型鉴定） 试管法 （Widal’s实验、Wright’s实验） 间接凝集 间接凝集抑制反应 妊娠检测（Pregnancy test）-人绒毛膜促性腺激素（HCG） Pregnancy test Result 尿HCG检测 免疫胶体金法。也就是平常的尿试纸条，该方法由于应用广泛，方法学较成熟，检测迅速，灵敏度高， 一般可达到10-25IU/L.也就是说尿中如果HCG水平达到10，就可能检测出来。女性妊娠到0.2-1周时血清中的HCG水平就可达到5-50IU/L，而在尿中清晨尿的HCG水平最高，可接近血清的水平，因此尿HCG检测以清晨的尿最佳，阳性率最高。 2、沉淀反应（Precipitation reaction） 毒素、组织浸液及血清中的蛋白等可溶性抗原与相应抗体反应后，出现肉眼可见的沉淀物，称为沉淀反应 。沉淀反应可在液体中进行，也可以在半固体琼脂凝胶中进行。 沉淀反应包括： 单向免疫扩散 双向免疫扩散 免疫电泳 免疫比浊 等 Countercurrent electrophoresis 3、免疫标记技术（immunolabeling techniques） 为了提高单纯的抗原和抗体检测的灵敏性，将已知的抗体或抗原标记上示踪物质，通过检测标记物，间接测定抗原抗体复合物。 常用的标记物有酶、荧光素、放射性核素、胶体金及化学发光物质等。 免疫酶测定法（enzyme immunoassay, EIA） 应用最广泛的方法是酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay, ELISA） 免疫荧光技术 荧光素标记的抗体（抗原）与组织或细胞中的相应抗原（抗体）结合，借助于荧光显微镜或流式细胞仪对抗原（抗体）进行鉴定或定位。 二、免疫细胞功能的检测 （一）免疫细胞的分离 根据细胞的密度、粘附性能、表面标志等，采用不同方法分离外周血单个核细胞、淋巴细胞及不同亚群。 密度梯度离心法: 用淋巴细胞分层液(葡聚糖-泛影葡胺) 除去红细胞、粒细胞,所获细胞称外周血单 个核细胞(PBMC)的方法，其中淋巴细胞90%。 免疫吸附分离法 磁珠分离法 流式细胞术 等等 （二）免疫细胞功能的测定 T细胞功能测定 1、T细胞增殖试验 T细胞表面含有有丝分裂原受体,能接受植物血凝素（PHA）、刀豆蛋白A（ConA）或美州商陆（PWM）等有丝分裂原的刺激，转化成为淋巴母细胞。 （1）形态计数法 （2） 3H-TdR或125I-UdR掺入法 （3） MTT法 Lymphocyte Transformation Test 2、E花环形成试验（ E Rosette Test ） B细胞功能测定 1、抗体形成细胞测定：常用溶血空斑试验 免疫学防治 应用各类生物或非生物制剂来建立、增强或抑