牛粪纤维素降解菌的筛选与初步鉴定-江苏农业科学.PDFVIP

江苏农业科学　２０１４年第４２卷第１１期 — ３９３— 牛明芬，武肖媛，于海娇，等．牛粪纤维素降解菌的筛选与初步鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０１４，４２（１１）：３９３－３９５． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０１４．１１．１３９ 牛粪纤维素降解菌的筛选与初步鉴定 牛明芬，武肖媛，于海娇，梁文娟，王思博 （沈阳建筑大学市政与环境学院，辽宁沈阳１１０１６８） 　　摘要：通过“富集—初筛—复筛”流程，筛选出４株对纤维素有强降解能力的菌株，分别标记为ＴＧ、ＨＮ、ＨＰ、Ｐ。 １ １ ２ ３ 对４株菌的纤维素酶活性进行了定量测定；通过生理生化试验，初步鉴定 ＴＧ 为放线菌，ＨＰ为地衣芽孢杆菌，Ｐ、 １ ２ ３ ＨＮ 为枯草芽孢杆菌。 １ 　　关键词：纤维素降解菌；分离；纤维素酶活；鉴定 　　中图分类号：Ｑ９３９．９　　文献标志码：Ａ　　文章编号：１００２－１３０２（２０１４）１１－０３９３－０２ 　　随着我国养牛行业的发展，牛存栏量也逐年增加。根据 单菌落在ＰＤＡ培养基上进行划线纯化，将纯化好的菌种接入 调查显示，２００９年我国奶牛存栏量达 １２６０万头，２０１０年的 ＰＤＡ培养基斜面保存。（２）复筛：将纯化好的菌株点接到羧 存栏量达１４２０．１万头。存栏量为２００～２０００头的肉奶牛基 甲基纤维素钠培养基上，放入３０、５０℃培养４ｄ，用刚果红染 ［１］ 地，每天可产生的牛粪在５～５０ｔ 。未经处理的牛粪随意堆 液进行染色，量取菌圈直径（ｄ）和透明圈直径（Ｄ），并计算透 放，不仅造成了人们的视觉污染，而且对大气、土壤、水造成了 明圈直径与菌圈直径比值Ｄ／ｄ，选取Ｄ／ｄ值与Ｄ值大的菌接 很大污染。相较于其他畜禽粪便，牛粪含纤维素、半纤维素等 入滤纸条液体培养基中，进行滤纸条崩溃试验，观察滤纸条崩 ［１－２］ 溃的快慢和程度。选取使滤纸条崩溃程度大的菌，分别接种 有机难降解物质比较多，自然降解时间长 。针对牛粪中 含纤维素较多且自然降解时间长的特点，本试验将降解纤维 于ＣＭＣ－Ｎａ液体发酵培养基、豆饼粉液体发酵培养基上，培 素能力强的菌株分离筛选出来，以期用于后续的牛粪堆肥试 养６４ｈ，测定纤维素酶活性。 验缩短牛粪堆肥发酵时间。 １．３．３　粗酶液的制备　取发酵液倒入离心管中，３０００ｒ／ｍｉｎ 下离心１０ｍｉｎ，上清液即为粗酶液。 １　材料与方法 ［４－５］ １．３．４　纤维素酶活性测定 　（１）羧甲基纤维素酶 １．１　样品采集 （ＣＭＣａｓｅ）活性测定：根据 ＧＢ２０２８７—２００６《农用微生物菌 土壤样品采自沈阳建筑大学树林落叶堆积处；牛粪样品 剂》进行羧甲基纤维素酶活测定；（２）滤纸酶（ＦＰＡ）活性测 采自本溪木兰花牛场的鲜牛粪、腐熟牛粪、堆积 １年的牛粪。 定：根据ＮＹ／Ｔ１８４７—２０１０《微生物肥料生产菌株质量评价通 落叶堆积处取样时，在土层５～１０ｃｍ处进行采样，平面采样 用技术要求》进行滤纸酶活性测定。 ［３］ ［