第九章植物原生质体培养与体细胞杂交演示幻灯片.ppt

第九章 植物原生质体培养与体细胞杂交; 原生质体培养的意义;;;;;第一节 原生质体的分离与纯化;（一）分离原生质体的材料来源;（二）分离原生质体的方法;（1）分离原生质体的酶类;（一）离心沉淀法;（二）接口法;;;第二节 影响原生质体产量和活力的因素;（一）植物叶片;（二）培养细胞;不同植物适宜于分离原生质体的材料;二、预处理;三、酶处理;1、酶种类、处理浓度、处理时间;四、渗透压;（一）渗透压保护剂;（二）应注意的问题;第三节 原生质体的培养;（一）基本培养基;（二）渗透压;（三）植物激素; （1）在原生质体培养中，加入2,4-D对于原生质体再生细胞壁，启动分裂，持续分裂直至形成愈伤组织是很有效的，如禾谷类植物。 （2）一般细胞分裂素和生长素以一定配比结合使用。 （3）由活跃生长的培养细胞分离的原生质体要求较高的生长素/分裂素配比才能进行分裂； 由高度分化的细胞如叶肉细胞得到的原生质体，常需要较高的分裂素/生长素配比才能进行脱分化。;（四）氮源;（五）复杂有机物;二、培养方法;原生质体培养一般采用液体培养;（一）液体浅层培养;（二）平板法培养 ;（三）悬滴法培养 ;（四）固液结合培养法;;三、培养密度;四、培养条件;第四节 由原生质体再生植株;一、原生质体再生细胞壁;二、细胞分裂形成细胞团或愈伤组织;;;;第四节 体细胞杂交;一、体细胞杂交及一般步骤;二、原生质体融合的一般过程;利用不同品系的甜菜叶肉细胞进行电融合 图中下方的黑带是电极。; 原生质体的粘连并不一定必然导致膜的融合。 如伴刀蛋白A或抗体都能促使原生质体的凝聚，但之后很少发生或不发生原生质体的融合。 植物原生质体表面所带的电荷会阻止原生质体的粘连。;三、原生质体融合方法;;1、化学融合法;诱导方法 1）收集原生质体； 2）将两种不同来源的原生质体以适当比例混合（如1：1），静置使之沉降，增加触融机会。 3）用28%-58%的PEG溶液处理15-30分钟，促使原生质体相互粘连； 4）然后用清洗培养基逐步清洗原生质体上的PEG，或用高PH高浓度钙离子溶液清洗。 注意清洗应逐步平缓进行，剧烈洗涤会减少异核体的形成。 5）融合体的培养。 诱导机制;四、原生质体融合产物的细胞学;普通小麦和簇毛麦体细胞杂交获得的杂种细胞染色体 (红色荧光者为普通小麦染色体，黄色者为簇毛麦染色体);五、杂种细胞选择;互补选择法;矮牵牛两个种的原生质体对培养基成分及 放线菌素D（抗代谢物）的敏感性存在差异;;;六、杂种植株鉴定;七、细胞质杂种;在原生质体能够完全融合情况下，胞质杂种可通过以下途径产生： （1）一个正常的原生质体与一个去核的原生质体融合； （2）一个正常的原生质体和一个核失活的原生质体融合； （3）在异核体形成之后二个核中有一个消失； （4）在较晚的时期发生染色体选择性的消除。;第六节 原生质体的应用价值;由普通小麦和高冰草经体细胞杂交获得的第三代植株