生物选修一专题5.2和5.3.pptVIP

导学案后面的习题答案 【专题五课题2】 1—8 DDCAB AAC 【专题五课题3】 1—8 BBBAD CBC Thank you！Good Luck！ 血红蛋白的提取和分离 蛋白质分子的差异性 凝胶色谱法 原 理 分离过程 凝胶电泳法 缓冲溶液 组 成 作 用 蛋白质的 提取分离 样品处理 粗 分 离 纯 化 纯度鉴定 多聚酶链式反应（简称PCR）：是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。能以极少量的DNA为模板，在几小时内复制出上百万份的DNA拷贝。 美国科学家（穆利斯）发明的PCR技术，1993年诺贝尔奖 。 教学目标: 1、说明PCR的原理和条件。 2、理解PCR的反应过程。 3、掌握PCR的基本步骤。 温故而知新——细胞内DNA复制的基础知识 参与的组分 在DNA复制中的作用 解旋酶 DNA母链 4种脱氧核苷酸 DNA聚合酶 引物 使DNA聚合酶能够从引物的3’端开始连接脱氧核苷酸 打开DNA双链 提供DNA复制的模板 合成子链的原料 催化合成DNA子链 DNA的平面结构——几个要点注意： A T G C A G C T 氢键 5端 3端 3端 5端 DNA的羟基（-OH）末端为3′端; 磷酸基团的末端为5′端 特性：不能从头开始，而只能从DNA的3′端开始延伸DNA链。因此DNA复制需要引物。 一小段DNA或RNA 3′端 5′端 5′端 3′端 DNA的合成方向：从子链的5′端向3′端延伸 母链 子链 DNA双链 单链 变性（加热80-100℃） 复性（缓慢冷却） 变性的目的： 复性的目的： 解开双链 有利于引物与两条单链结合 一、PCR原理： 细胞内 反应环境 DNA聚合酶 聚合酶 需要 解旋酶 需要 引物 4种脱氧核苷酸 原料 DNA模板 模板 PCR 体内DNA复制 DNA模板 4种脱氧核苷酸 需要，两种 （引物I和引物II） 不需要，控制温度 （PCR仪器） Taq DNA聚合酶 （耐高温） 缓冲液 二、PCR的反应条件： 三、PCR的反应过程： PCR一般经历三十多次循环，每次循环可以分为： 复性 变性 延伸 当温度上升到90℃左右，双链DNA解旋为单链。 当温度下降到50℃左右，两种引物通过碱基互补配对与两条单链DNA结合。 当温度上升到72℃左右，游离的四种脱氧（A、T、C、G）在DNA聚合酶的作用下，根据碱基互补配对原则合成新的DNA链。 5/ 3/ 3/ 5/ 5/ 3/ 引物Ⅰ 5/ 3/ 引物Ⅱ 变性95oC 复性55oC 延伸72oC 5/ 3/ 3/ 5/ 三、PCR的反应过程： 5? 引物1 5? 引物2 第二次复制 第一次复制 5? 5? 5? 5? 5? 5? 模板DNA 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 5? 25～30 次循环（复制）后，模板DNA的含量可以扩大100万（220）倍以上。 利用PCR技术扩增 循环特点： ①上一次循环的产物为下一循环的模板； ②结果单链中有最初母链的只两条（无引物） 存在于两个子代DNA分子中； ③其它子代DNA分子都为双引物分子式； ④扩增的是两引物之间的DNA序列，其呈指数增长1×2N。 三、PCR的反应过程： 准备好PCR反应体系的配方 用微量移液枪按配方在往微量离心管中加入各组分 盖严盖子，用手指轻轻弹击管壁混合反应液 离心10S 将离心管放入PCR仪上，设置好循环程序进行反应 四、实验操作： 循环数 变性 复性 延伸 预变性 94℃，10min － － 30次 94℃，30s 55℃，30s 72℃，1min 最后一次 94℃，1min 55℃，30s 72℃，1min 1、为了外源DNA等因素的污染，所用微量离心管、枪头、缓冲液以及蒸馏水等在使用必须进行高压灭菌； 2、PCR所用的缓冲液和酶应分装成小份，并在-20℃储存。 3、在微量离心管中添加反应成分时，每吸取一种试剂后，移液器上的枪头都必须更换。 五、操作提示： 多聚酶链式反应扩增DNA片段 PCR原理 DNA的复制需要酶、原料、能量、引物DNA的变性和复性受温度影响 PCR过程 变性 复性 延伸 操作步骤 配制PCR反应体系 移入离心管 放入PCR仪 设置工作参数 DNA扩增 测定含量 稀释 调零 测定并读数 计算 课堂小结 血红蛋白（90％） β β α α 血红素基因 教学目标: 1、理解凝胶色谱法、电泳法分离生物大 分子的原理和缓冲液的组成、作用。 2、体验血红蛋白的