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临床检验基础学实验指导 血液常规检验 【实验目的】：掌握微量吸管的使用、毛细血管采血、计数板的鉴定、构造与使用。 【实验试剂】：红细胞稀释液、75％乙醇、消毒药棉。 【实验器材】： 一次性采血针、计数板、盖玻片、微量吸管、2ml吸管、中号试管、显微镜、小玻璃棒。 【实验原理】：一次性采血针刺破毛细血管后，用微量吸管吸取一定量的血液，稀释一定的倍数，冲入计数池计数一定体积内的细胞的数量。 【实验方法】：一、微量吸管的使用：用抗凝血训练微量吸管的使用。 二、毛细血管采血（以红细胞计数为例）： 准备：取清洁干燥试管一支，加2ml红细胞稀释液。 采血部位选择、按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→待酒精挥发干（否则血流不成滴）→自指尖腹内侧迅速刺针→擦去第一滴血→准确吸取10ul血液→用无菌干棉球压住伤口止血→用无菌干棉球擦去管尖外围余血后→将血液释放到稀释液底部→回吸上清液2-3次→轻轻混匀。 三、计数板构造与应用 1．计数板构造 外观构造：每块计数板由“H”型凹槽分上下两个计数室，在计数室两侧各有一条支柱，比计数室高出0.1mm，将一块平整光滑的血细胞计数专用盖玻片（24.0mm×20.0mm×0.6mm）覆盖其上时，盖玻片与计数室间形成0.1mm的缝隙。 格子构造：计数池长、宽各3mm，平均分成9个大格，每个大方格的容积是0.1 mm3四角的四个大方格分别用单线划分成16个中方格，是白细胞计数区域；中央的大方格用双线条划分成25个中方格，每个中方格又用单线划分成16个小方格，其中四角和正中的5个中方格是红细胞计数区域。 2．计数板的使用： 用清洁干燥柔软的纱布擦拭计数板及盖玻片→用推盖法从计数板下缘向前平推盖玻片将其盖在计数室上→充分混匀细胞悬液→充池→静置→观察细胞分布情况（若严重不匀，应重新充池。） 【注意事项】： 1．采血部位应选择皮肤完整，不能有烧伤、冻疮、发绀、水肿或炎症。 2．针刺应迅速，深度适宜（约2－3mm）。待血液自行流出，擦去第一滴血。 3．微量吸管取血时应将微量吸管管尖侧着插入血滴中央。若血流不暢，可以左手自采血部位远端向指尖稍压力至血液流出为止。切忌用力挤压，造成组织液混入，影响结果准确性。 4．计数板在使用中勿让手指接触计数池及盖玻片表面，以访油腻污染，致使充液时起泡。 二、血涂片的制作,瑞氏染色 【实验试剂】：瑞－吉氏复合染液 （Ⅰ液、Ⅱ液） 【实验器材】：显微镜、载玻片、推玻片、一次性针头、消毒棉球、洗耳球 【实验原理】：细胞的着色既有化学的亲和作用，又有物理的吸附作用，不同的细胞由于其所含化学成分不一样，化学性质各不相同，所以对染料的亲和力也不一样，因此将细胞染成不同的颜色。 【实验方法】：一、瑞一吉氏复合染液配制 Ⅰ液：取瑞特染粉1g，吉姆萨染粉0.3g，置洁净研钵中，加少量甲醇（分析纯），研磨片刻，吸出上层染液，再加少量甲醇，继续研磨，再吸出上层染液。如此连续几次，共用甲醇500ml。收集于棕色瓶中，每天早晚各振摇3′共5天，再存放一周，将染液过滤后即可使用。 Ⅱ液：磷酸盐缓冲液（PH6.5—6.8），取磷酸二氧钾（无水）6.64g，磷酸氟二钠（无水）2.56g，加少量蒸馏水溶解，调整PH后，加水至1000ml。 二、血片制作、瑞氏染色方法 准备：取清洁干燥载玻片，边缘光滑清洁推玻片各一张。 1、制备血涂片：取载玻片→取血1滴于载玻片右端（边缘留1.5cm空隙）→左手持载玻片，右手持推玻片→将推玻片放至血滴前沿逐渐后移至血滴沿推片散开后，推玻片与载玻片成30°～35°的夹角以平稳的速度将血液向前推进→干燥（手持载玻片末端迅速在空气中挥动干燥）。 2、染色：将干透的血涂片放在水平位置→加瑞吉氏复合染液Ⅰ液数滴，以染液覆盖整个血膜为度→静置染0.5～1min→滴加约2倍于Ⅰ液量的Ⅱ液→用洗耳球吹气混匀→染色5－10min→平持玻片用流线型水洗→干燥→镜检 【注意事项】： 1．严格皮肤消毒。 2.血滴大、血黏度高、推片角度大、速度快则血膜厚，反之则血膜薄。 3.染料放置时间越长，美兰逐渐氧化为天青，染色效果越好。 4．染液淡，室温低，细胞多则染色时间长，反之减少染色时间。 5．水洗方法为平持血涂片流线型水缓缓冲洗干净，不要先倒掉染液。 三、白细胞计数（WBC） 【实验目的】：掌握白细胞计数的原理、操作方法与结果报告。 【实验原理】：用白细胞稀释液将全血稀释一定的倍数并破坏红细胞，充入血细胞计数池，显微镜下计数一定体积的白细胞数，经换算求出每升血液中的白细胞数量。 【实验试剂】：白细胞稀释液 【实验器材】： 显微镜、改良Neubauer计数板、试管、微量吸管、玻璃棒 【实验方法】：准备：取清洁干燥试管一支，加0.38ml白细胞稀释液。 采血部位按摩→75％乙醇棉球进行刺针部位皮肤消毒→