清醒动物脑部微透析操作流程-瑞沃德商城.PDFVIP

深圳市瑞沃德生命科技有限公司 清醒动物脑部微透析操作流程 一、微透析技术基本原理 微透析技术是一种在体微量化学采样与检测技术，由西班牙之Delgado 及瑞典之Ungerstedt 等人于 1972 年自更早的压抽导管（push-pull cannula ）改进而来。 其基本的原理（如右图 所示）：选择具有一定截留分子量的纤维半透 膜制成的探针埋入待测的组织区域，以恒定速 度向探头内灌注与组织液成分相近的等渗灌 流液，当灌流液流经探头前端透析膜时，组织 内小分子量生物活性物质即顺浓度梯度从膜 外扩散入膜内，并随灌流液被引流至探针外， 按一定的时间间隔连续收集透析液，检测其中 待测生物活性物质水平，可监测该区域内细胞 外生物活性物质浓度的经时变化过程。 二、实验材料 1. 麻醉、定位手术： 异氟烷麻醉系统（含麻醉空气泵、麻醉机、脑立体定位/ 回收面罩、麻醉诱导盒、异氟烷）、 废气回收系统（含活性碳过滤罐、气体回收器或气体回收泵）、颅钻（含钻头）、冷光源、显 微镜、体温维持仪、脑部微透析或微注射动物手术器械包（主要含#3 号手术刀柄、11#手术 刀片、手术剪、精细剪、撑开器、组织镊、三角缝针、缝线、止血钳、微型凝血器、十字小 螺丝刀、灭菌盒、动物剃毛器、碘伏、酒精棉球、无菌干棉球、） 2. 微透析： 微透析泵、1-5mL 规格注射器、探针及配件（导管、导管帽、锁紧螺帽、探针夹持器、导管 定位适配器）、低温冷冻收集器、样品收集管、连接管路、管路接头、清醒活动装置（含动 物活动笼）、牙科水泥（含牙托粉和牙托水）、灌流液 3. 个人防护： 一次性乳胶手套、实验服、鞋套、口罩、帽子 三、操作步骤 1、动物准备 （1）动物麻醉与固定：①将脑立体定位/ 回收面罩安装于动物适配器上，面罩入口与出口分 别连接麻醉系统和废气回收系统，如下图2 所示；②快速诱导麻醉：手提动物尾根部，将动 物放入麻醉诱导盒，打开麻醉系统（氧气流量调节：大鼠一般为500-700ml/min，小鼠一般 1 深圳市瑞沃德生命科技有限公司 为300-500ml/min，异氟烷浓度调为4-5% ），通入异氟烷麻醉气体，一般5min 左右，动物即 进入深度麻醉状态（可通过动物的呼吸、眼角反射、摇晃诱导盒综合判断动物的状态）； （2 ）动物固定：将麻醉气体转换开关通向脑立体定位/ 回收面罩，调节异氟烷维持麻醉浓度 （大鼠一般2-2.5%，小鼠一般为 1-1.5%），从诱导盒取出动物，通过“固定门齿、压鼻梁、 左右耳道插入耳杆”三部位固定动物头部；固定时，务必使动物头部处于水平状态（具体操 作详见第（5 ）步）； （3 ）备皮：①用剃毛器将头部手术部位及周边部位的毛发剔除干净；②依次用碘伏、酒精 棉球消毒； （4 ）暴露颅骨：①用手术刀片沿颅面中线切开头皮，切口长度约1cm，剔除颅骨表面的软 结缔组织，再用无菌干棉球轻轻擦拭颅骨表面，即可清晰地看到前囟（Bregma）部位的十 字缝线和后囟（Lambda）部位的人字缝线； （5 ）定位调节：此步骤对于精确将探针定位到目标核团非常重要，可通过几个操作确定， ①首先，保证动物的鼻尖与适配器的中心线在一条直线上；②夹持一根注射针，针尖刚好接 触前囟点，然后以此点为标准，依次沿前囟→后囟的方向移动，在中间和后囟再取两个点， 观察针尖是否也刚好接触这两个点，否则需调节适配器的高度；③左、右耳杆高度应一致、 位置需对称保持平衡；④用拇指和食指轻捏动物左右额面，摇晃头部，看是否晃动，否则需 调节鼻杆固定； （6 ）定位钻孔：①参考脑立体定位图谱， 精确找准目标核团（比如海马）水平方向的 X 、Y 坐标点（AP 值和ML 值），此点即为导 管或探针植入的点；②钻孔：选择与导管的 杆外径尺寸近似的钻头（比如导管的杆外径 为0.6mm，则可以选择0.8mm 直径的钻头）； 同时，需另外钻两个孔安置固定螺丝（同样， 需选择与螺丝直径尺寸近似的钻头，比如螺 丝直径为 1mm，则钻头可以选择0.8mm ）， 2 深圳市瑞沃德生命科技有限公司 这两个孔的位置与植入导管的孔一般成正三角形（如下图3 所