大肠埃希氏菌－胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建-中国兽药杂志.PDFVIP

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2018-08-18 发布于天津
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大肠埃希氏菌－胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建-中国兽药杂志.PDF

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大肠埃希氏菌－胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建-中国兽药杂志

中国兽药杂志２０１７年８月第５１卷第８期　　ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇ ·１· －ｄｏｉ：１０．１１７５１／ＩＳＳＮ．１００２１２８０．２０１７．８．０１－大肠埃希氏菌胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体构建李建，张磊，张媛，彭国瑞，王秀丽，刘博，辛凌翔，罗玉峰，蒋玉文∗ （中国兽医药品监察所，北京１０００８１）－－－－－［收稿日期］２０１７０１１８　［文献标识码］Ａ　［文章编号］１００２１２８０（２０１７）０８０００１０５　［中图分类号］Ｓ８５２．６１［摘　要］　合成胸膜肺炎放线杆菌质粒ｐＫＭＡ２４２５上长度为１２６ｂｐ及２２１４ｂｐ的２个ＤＮＡ片段，克隆到大肠埃希氏菌质粒ｐＧＳＩ中，获得重组质粒ｐＧＳＩＡ。ＰＣＲ扩增ｐＴＫＲＥＤ上的大观霉素抗性基－－因及线性化的ｐＧＳＩＡ（１２６ｂｐＤＮＡ片段ｐＧＳＩ２２１４ｂｐＤＮＡ片段），连接，电转化胸膜肺炎放线杆菌，在大观霉素的选择压力下筛选鉴定到连接正确的质粒，命名为ｐＧＳＩＡＳ。ｐＧＳＩＡＳ测序结果符合预期。在大观霉素的选择压力下，含有ｐＧＳＩＡＳ的胸膜肺炎放线杆菌血清１～１０型菌株均生长良好；在氨苄青霉素的选择压力下，含有ｐＧＳＩＡＳ的大肠埃希氏菌生长良好。结果表明本研究构建的大肠－埃希氏菌胸膜肺炎放线杆菌穿梭载体ｐＧＳＩＡＳ序列正确，在胸膜肺炎放线杆菌及大肠埃希氏菌中均能复制并表达质粒上的相关基因。［关键词］　大肠埃希氏菌；胸膜肺炎放线杆菌；穿梭载体－ＣｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎｏｆＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉＡｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅＳｈｕｔｔｌｅＶｅｃｔｏｒ－－－ＬＩＪｉａｎ，ＺＨＡＮＧＬｅｉ，ＺＨＡＮＧＹｕａｎ，ＰＥＮＧＧｕｏｒｕｉ，ＷＡＮＧＸｉｕｌｉ，ＬＩＵＢｏ，ＸＩＮＬｉｎｇｘｉａｎｇ， ∗ －－ＬＵＯＹｕｆｅｎｇ，ＪＩＡＮＧＹｕｗｅｎ（ＣｈｉｎａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＤｒｕｇＣｏｎｔｒｏｌ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１０００８１，Ｃｈｉｎａ）－－　　Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇａｕｔｈｏｒ：ＪｉａｎｇＹｕｗｅｎ，Ｅｍａｉｌ：ｊｉａｎｇｙｕｗｅｎ＠ｉｖｄｃ．ｏｒｇ．ｃｎ－－Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ１２６ｂｐｌｅｎｇｔｈＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔａｎｄａ２２１４ｂｐｌｅｎｇｔｈＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｆｒｏｍＡｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅｐｌａｓｍｉｄｐＫＭＡ２４２５ｗｅｒｅｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄａｎｄｔｈｅｎｃｌｏｎｅｄｉｎｔｏｐＧＳＩ．ＴｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔｐｌａｓｍｉｄｗａｓｎａｍｅｄｐＧＳＩＡ．Ｓｐｅｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｇｅｎｅ