在Essential8培养基中使用LipofectamineStem转染试剂转染多能性.PDFVIP

转染实验方案 Lipofectamine Stem转染试剂 在Essential 8培养基中使用Lipofectamine Stem转染 试剂转染多能性干细胞 PSC生长培养基、传代试剂及络合培养基 组分 货号 Essential 8培养基 A 1517001 重组人玻连蛋白(VTN-N) ，截短型 A 14700 不含钙和镁的杜氏磷酸盐缓冲液(DPBS) Versene溶液 RevitaCell添加剂 A2644501 Opti-MEM I减血清培养基 使用未分化的人多能性干细胞(PSC) ，在无滋养层培养系 Gibco ™ Rev itaCell™添加剂。PSC可以在Essent ial 8和 统中扩增(如Gibco™ Essential 8™培养基和玻连蛋白等成 Essential 8 Flex培养基中互换扩增，支持灵活的补料方案。 分确定的基质) ，是实现高效转染的理想选择。在扩增和 此外，还可以在Gibco™ rhLaminin-521或Gibco™ Geltrex™ 接种或重新接种细胞用于转染的过程中，我们也建议使用 基质及Essential 8培养基中成功完成扩增和转染。 Gibco™ Versene™溶液进行传代与扩增。使用EDTA对PSC 培养物进行温和解离，可形成均质的小细胞团块，以实现 使用玻连蛋白预包被24孔板 高效转染。 1. 在6 mL不含钙和镁的DPBS中稀释60 μL玻连蛋白储液 (0.5 mg/mL) ，制备1:100稀释的玻连蛋白，使其成为终 传代 浓度为5 μg/mL的工作液。 • 以您选择的培养形式维持PSC ，如包被有玻连蛋白的6 2. 在每个孔中加入200 μL稀释的玻连蛋白，室温孵育1小 孔板、60 cm培养皿或T-75培养瓶，使用Essential 8培养 2 时，以0.5 μg/cm 玻连蛋白的浓度包被24孔板。 基或Gibco™ Essential 8™ Flex培养基培养。 ° - 在6孔板中扩增PSC ，然后转移至24孔板进行转染， • 提示：玻连蛋白包被的培养板可提前制备，并置于4 C 该实验方案采用的常规形式。 保存至多1周。接种细胞前先室温平衡至少1小时。 • 每3至5天当PSC生长至约85%汇合度时，传代一次。 • 提示：使用Versene溶液进行PSC的常规传代与扩增时， 重新接种5-10个细胞的较大的细胞团块可以促进细胞在 Essential 8培养基及玻连蛋白中的重新贴壁和存活，且 无需加入 接种细胞用于转染