光合作用条件下烟草叶片中的NADP含量分析.PDFVIP

维普资讯 植物生理学通讯 第41卷 第5期，2005年 10月 649 光合作用条件下烟草叶片中的NADP含量分析 王鹏 叶济宇 米华玲 中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所 ，上海200032 DeterminationofNADPinTobaccoLeavesUnderPhOt0syntheticConditions WANG Peng，YEJi—Yu，M IHua—Ling InstituteofPlantPhysiologyandEcology，ShanghaiInstitutesforBiologicalSciences，ChineseAcademyofSciences，Shanghai 200032，China 提要 用酶循环法在叶片水平上分析NADP含量的结果显示，在光照条件下，NADP含量呈现出先迅速下降进而缓慢上 升的变化，上升过程受高温和抗霉素A(antimycinA)抑制，说明此法所得结果能够反映光合作用条件下叶中内源NADP 含量的变化趋势。 关键词 NADP含量 酶循环法 NADP(辅酶II)作为叶绿体 内重要的氢受体， 全展开的叶片作实验。切取直径为 1cm的烟草叶 通过光合 电子传递形成NADPH(还原型辅酶 II)， 圆片20片，叶面朝上浮于 28℃恒温水浴的水面 进而与光合磷酸化反应生成的ATP一起推动CO， 上，在约500gmol(光量子)．m-2,s光照下处理 1h。 同化，NADPH重新氧化为NADP。叶绿体内源 热处理时，水浴温度升至42℃；抗霉素A(anti． NADP含量很低[仅 10一mo1．mg。(Ch1)]，有人 曾采 mycinA)处理时，预先将5或7．5pmo1．L 的溶液真 用高灵敏度的酶循环测定法对菠菜离体叶绿体中 空渗入叶圆片，以渗入水为对照。 NADP／NADPH作了分析 ，2】。但如要分离到具有 2样品制备 同化CO，活性的完整叶绿体，除了菠菜和豌豆等 经 以上处理的叶圆片再暗适应 5min，并在 少数材料外，其他植物材料尚有一定的难度。因 暗中取出4片，投入 1mL0．5mo1．L～HCIO 中研 此，若能直接从叶片中分析NADP，并能反映其 磨固定 ，作为暗处理样品。重新照光，分别在 在光合作用条件下的氧化还原情况，其生理意义 不同时间取出4片叶圆片制备光处理样品，取材 是不言而喻的。另外，叶片中还原物质的干扰与 和研磨必须保持在约500gmol(光量子)．m-2,s光下 分析仪器灵敏度偏低之间的矛盾也是需要研究克服 迅速进行。以酸固定的样品在室温下放置 5min 的问题。我们在研究烟草光合作用时，感到制备 后，10000xg离心3min，取上清液，加入55 具有同化cO，活性的离体叶绿体难度较大，为 1．2mo1．LJ三乙醇胺(终浓度约60mmo1．L。)，并 此，直接 以烟草叶片为材料对分析NADP含量的 以饱和KCO调pH至7．6，离心后上清液置于冰 方法进行了探索，结果表明此法在一定程度上可 浴中备用 。 以反映光合作用条件下叶中内源NADP含量变 3酶循环法测定 化 ，现报告如下 。 每40mL基本反应液中含20mL0．1mo1．L Tris—HCI(pH7．9)、1．2mL0．1molL·～EDTA、600 材料与方法 L5mmo1．L。二氯酚靛酚(DCPIP)、18．4mL水。 1植物材料 烟草(Nicotianatabacumcv．Xanthi)~植于人 收稿 2004．12-27 修定 2005．04．21 资助 国家 自然科学基金。 工气候室(12h光照112h黑暗；光照度约300gmol