[调研报告]开题报告刘爱群.pptVIP

广西医科大学硕士研究生学位论文开题报告 学科专业 生理学 研究生姓名 刘爱群 导师姓名 谢露 报告日期 2004-12-13 一、研 究 题 目 海带多糖对肾上腺素致大鼠主动脉内皮细胞表达PAI－1的影响 二、立 题 依 据 （1） 海藻类药物及保健品的开发一直是国内外研究的热点。它的大部分生物活性和其主要成分多糖密切相关. 褐藻糖胶具有明显的抗凝血和促纤溶的药理学活性，其副作用少，可作为预防血栓形成的药物或保健，且来源丰富。 二、立 题 依 据 （2） 多种心血管疾病如动脉粥样硬化（AS）,高血压均易形成血栓，从而导致心，脑，肾等事件的发生。 目前，对AS，高血压的发病机制已逐渐偏重于血管内皮细胞，认为内皮细胞功能紊乱及其调控障碍可能是其发病关键。 PAI－1 主要源于内皮细胞，是纤溶系统的重要组成部分。受损的内皮细胞在局部分泌PAI-1增加。 二、立 题 依 据（3） 纤溶系统是体内抵抗血栓形成的主要内源性防御机制之一。 纤溶酶原激活物抑制剂（PAI－1）是血浆组织型纤溶酶原激活物（t－PA）的主要生理性抑制剂，是决定纤溶活性的一对重要的纤溶因子. 目前研究认为，PAI－1异常表达在血栓形成及动脉粥样硬化的发病机制中具有重要作用。 二、立 题 依 据 （4） 从细胞分子生物学水平探讨海带多糖抗血栓形成，保护血管内皮功能的作用机制，进一步为海带多糖在未来临床心血管疾病用药的开发中提供实验依据。 三、国内外研究现状及分析 血管内皮细胞的培养在国内细胞水平研究也日臻完善，已有多方面研究各种理化因素、致病因子等诱导血管内皮细胞功能改变的报道，PAI-1,VWF,TF,t－PA等作为VEC功能改变的分子水平的研究，也成为热点。 国外也有多篇血管内皮细胞在各种理化因素、致病因子等作用下对PAI－1的表达影响机制的报道，进一步反映了PAI—1在血栓形成中的意义。 但海带多糖对肾上腺素致大鼠主动脉内皮细胞表达PAI－1的影响及机制的研究国内外尚未见报道。 四、研 究 目 的 从细胞分子生物学水平探讨海带多糖是否通过影响受损内皮细胞纤溶系统中PAI－1的活性和mRNA表达的改变而发挥抗血栓的作用机制之一。 为临床心脑血管血栓形成疾病新药研制开发提供实验室依据。 五、科研设计方案 提取分离纯化海带多糖。 细胞培养建立模型。 测定所需指标，进行统计学处理。 六 实验内容（1） 用酶解碱浸酒沉法提取海带粗多糖，经H2O2脱色，蒸馏水透析，并紫外光谱280nm扫描确认无蛋白吸收峰后，采用DEAE柱层析，硫酸－苯酚法跟踪收集F1，烤干备用。 六 实验内容（2） 取Wistar大鼠主动脉血管内皮酶消化法原代细胞培养，1：2－3比例传代，并采用VIII因子相关抗原免疫组化鉴定确认为内皮细胞，取3—5代细胞分四大组进行实验。(对照组：不加实验药物；肾上腺素组：分别加入不同浓度的肾上腺素；海带多糖组:分别加入不同浓度的海带多糖；肾上腺素＋海带多糖组：同时分组加不同浓度的肾上腺素和海带多糖。) 六 实验内容（3） 分别于12小时，24小时取各组细胞培养上清液，用发色底物法检测各组条件培养液中的PAI－1的抗原含量。 六 实验内容（4） 取培养细胞经裂解后提取RNA，设计特异性引物，行RT－PCR测各实验组中大鼠主动脉内皮细胞PAI－1的表达。 关键技术 海带多糖的分离与提纯制备。 血管内皮细胞培养。 PAI－1抗原活性的测定。 PAI－1基因mRNA表达的测定。 研究进度 时 间 完成工作内容 2004.5---2004.11 分离提纯海带多糖 2004.12---2005.12 动物细胞培养模型建立 测定各组PAI－1抗原活性 PAI－1基因mRNA表达的测定 2006.1---2006.6 资料整理，论文书写 等 * *