国际上牛胚胎移植及胚胎工程演示幻灯片.pptVIP

国际上牛胚胎移植及胚胎工程应用现状; 笔者于2002年6月20日—7月8日和2004年3月19日—4月7日分别陪同省长钮茂生、省委书记白克明率领的河北省经贸代表团两次赴澳、新、韩三国访问。 2004年4月—7月先后接待了澳大利亚SPB的总经理刘永树先生、法国Salers（萨来尔）牛协会主席和阿根廷胚移专家Carlos Munar（卡罗斯·莫纳）到河北的来访，就牛胚胎移植相关问题进行了交流，现将上述几个国家有关牛胚胎移植应用情况归纳如下： ;;;一、体内胚胎生产（超数排卵）与胚胎移植情况 ; 2．胚胎移植规模 他们用上述方法每年超排牛4000—5000头，头均获可用胚胎6枚左右，最高1头获69枚胚胎。 法国Salers牛，每年胚移10000头以上，鲜胚妊娠率70%左右。主要用于选种。 ;表1 阿根廷莫纳胚胎移植公司用体内胚胎鲜胚移植结果;二、用屠宰场母牛卵巢卵母细胞体外生产胚胎;三、澳大利亚SPB采用活体采卵（OPU）、体外受精（IVF）和胚胎移植（ET）对牛进行集中繁殖 ;第一步 健康检查 供体母牛必须身体健康，生殖系统良好，先前做过MOET的母牛或具有生殖疾病的母牛被列为“劣质牛”，因为这样的母牛不能高效而准确地生产胚胎。先前做过MOET的母牛可能由于操作或激素的原因造成粘连或卵巢囊肿、卵巢静止等。 ;第二步 供体牛选择 1、适宜活体采卵母牛的生理时期 （1）14月龄以上发情周期正常的青年牛和成年母牛。 （2）分娩后恢复发情周期的泌乳母牛，且未在产乳高峰期的母牛。 （3）干奶期的母牛。SPB（南太平洋生物技术有限公司）认为，干奶期的母牛是最好的供体选择。 （4）人工授精后3—4周未出现返情的母牛或怀孕3个月以上的母牛。 ;供体牛群;2、活体采卵间隔时间及水平。 母牛每周采卵1-2次。可间隔3-4天进行连续的采卵，对于正常母牛，无须进行激素刺激；但是当母牛采卵数少于7个时，可用外源激素进行适当调节。通常的做法是每14天做一次外源激素刺激；每收集一次卵子，可培养发育1.5-2.0个A、B级胚胎，这样一周采集2次，可获3.0-4.0个优质胚胎。 SPB每年每头牛可获胚胎约160枚。;3、影响活体采卵的因素及采卵效率。 （1）对于有过生殖疾病的母牛或做过MOET的母牛，即使现在它们的生殖系统健康，不能期望高于平均值；（2）老年母牛采卵数少，并且质量很差；（3）泌乳期的母牛，尤其在泌乳高峰期，采卵数会很低；（4）营养状况十分重要，母牛处于能量与营养平衡时会生产更多、更优的胚胎，但母牛不能过于肥胖。 专门的活体采卵人员可以在6个小时采集25头左右。 ;第四步 体外受精与胚胎生产 ;2、卵母细胞成熟、精子获能、受精与早期胚胎培养 收集的卵子检出后放进培养液并送到实验室进行体外受精，受精后需培养7天。受精液、培养液均为SPB自己配制。 ;;3、体外受精与胚胎发育有关指标 用OPU的采卵数，世界平均水平（非激素处理），每头母牛可以一次采得5—8枚卵子。但是，即使大多数卵子都受精，也只有25%—30%的卵子发育为可供移植的胚胎，所以每头母牛每次采卵只获得1.5—2枚A、B胚胎。运用激素可以提高获胚数，但是不稳定因素也相应增加。 ;4、性别控制与胚胎性别鉴定 （1）x、y精子分离 采用流式细胞分离法 2002年悉尼大学精子分离速度2万/秒，720万/小时，2004年SPB公司10万/秒，3.6亿/小时，24小时可分离86.4亿，按每头输精量1000万—1500万计算，每天分离的精子可供864—576头牛输精。主要问题：一是分离速度慢，二是对精子活力有影响。适用体外受精或显微受精。; SPB目前正在研究x、y分离的新方法。即经荧光染色的精子放入流式细胞分类器的流动小室中，然后经小孔中流出，不让精子带电荷，通过紫外线激光杀死y精子，红外激光杀死x精子，只选择一种精子，这样分离速度加快，方法也简便。这种方法还在中试当中。 ;（2）胚胎性别鉴定 SRY—PCR鉴定法： 借助显微操作仪从桑椹胚或囊胚中分离几个细胞，提取DNA，用PCR扩增后，根据荧光（亮）的为公，暗的为母。 ;;5、胚胎冷冻与移植效果 所获胚胎用澳大利亚产冷冻仪进行常规冷冻。OPU和IVF胚胎进行冷冻，解冻后A级胚胎有40%在移植后产犊，B级胚胎为30%—35%，性别鉴定的胚胎只能达到30%左右。 ;;第五步 受体牛的选择与同期发情处理 ;（4）身体结构良好，母性能力强，适合当地气候条件。在受体选择过程中，其身体结构和性情也是十分重要的：骨盆面积和宽度，蹄形，乳房与乳头结构，母性能力与