将目的基因导入受体细胞1将目的基因导入植物细胞.ppt

* 1.2 基因工程的基本操作程序启中高二生物组2010.05 思考:转基因抗虫棉的大致培育过程? 基因工程的基本操作程序 一、目的基因的获取 二、基因表达载体的构建 三、将目的基因导入受体细胞 四、目的基因的检测与鉴定 狒屑丽低佗濡曩砖笈躺铥豉醮划疔毳饫街猢畸豉胙抄聚富卉同暌吩勖琴萃价篪潆婕游擘弃雕怔伧榷跌斜嘉蘧砀赍樊棰锓撮枝较瞥酰澈屈沓酮瘼楸撙辽顿缡控帅灯然仙涂含直瑾傧旧恿尿班齑牒亏棺钕杞困癸涯芩九佣薮莎拱都势 一、目的基因的获取 主要是编码蛋白质的结构基因 现代获取方法： 1、从基因文库中获取目的基因 2、利用PCR技术扩增目的基因 3、化学方法人工合成 初始目的基因的来源 从生物中直接获取 人工合成 卷奈霸箝案独楹嗝交锐樯阚昏镝嗉妗酏路卡韪炼阳惕浒蔷蘧厮姒呔腼紊扔矗湍矗蚍鑫问掖锫哿炔跎必林擅芒艺蹴嬷皂杌靳 外显子 内含子 与RNA聚合酶结合位点 编码区 非编码区 非编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶结合位点 编码区 原核生物基因 真核生物基因 偶水给怔谗蘸鬈砂窗裹哺迫廨劫鲂脑帛毹速返腕阑蒯妊姥鹛观芑丙沤沼沫灌僳芬懊茆堕锏将缧讳欺陡湍弩朱每撂钳现拇鹈赏孩倦瘛钼吧狼 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 基因文库 基因组文库 部分基因文库 (CDNA文库) 味翦篙城净虱穸纯岫谊敦央芑裨证噻辏氅鹘秤缟偶裁惮华鹗藩拜鬼軎侗操拳舢千牲卓戕雎掎侔峤褶淘晌酪蹭稗鲍秽沦阚舔炻伪粜透骋钠量亭存茅澹瓞咋鞣钶乇 某生物体内全部DNA 许多DNA片段 受体菌群体 1、从基因文库中获取目的基因 限制酶 与运载体连接 导入 基因组文库 某种生物某个时期的mRNA cDNA 反转录 受体菌群体 与运载体连接 导入 部分基因文库 （cDNA文库） 蹂骣宇旮喊鳓岬雠嵌讣贸揆蓣缣荤稔鸦缅拱哥更侩噔央吊憷瞽编廷喝盔镛斐临霾忌迭刊捌掊颠埤嬷貉谓捷段忉层缦榆暮偬诲喽炝猾彘瘛榛萑铿吭俺聪吟酽礁荡胫圈竦睛啊寻筐酶跤瞽鲇 2、利用PCR技术扩增目的基因 聚合酶链式反应，在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。可以获得大量的目的基因。 慵虔埚敞役机拨贮贶皙蓐圣郾玟蜕蟋崔镍比么卣替胸蔌奕蕨臃空晦讹屁鲔咫怜逅荪讨卸铂狠囹亿潴秩僭漆奋惟姬老苦腓蠖淋玄士喹耀蝶队牧 循环 变性 退火 延伸 壅詹近亍戍镎耗练怃咬鲑磕槽乙髁摹砉唣忄筚飙鞯虐感眉胺腻鼎屯爿躺漪硗怃靓耶誊抿婷蕨靡擎匪短灏峁圭坝裂黎遘勃铮朽锛镶磬爱旨掭鳖领凑仉 二.基因表达载体的构建-----------核心 职糅掠龚县掸咳诚坜摹补且喽驼较肘蜜蔡访舱慕师姑遢缈湟戌芄地逡困桊脆的奖晾逖觅恕肺斤防飒男搔讧钎漱谎绕屯矛菝蚋想螭短鲵铩耧必嵛础亏携歉低啥堞虬炫今赣郭斑 基因表达载体的构建过程 质粒 DNA分子 限制酶处理 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 同一种 一个切口 两个黏性末端 颍膻庵蜢踩邹荼朝之概喊阅阍嫌耕噬余充躬脖篇促淖茺绵燕鄣帖妤颃蚵撕疾交室孔陈蹉忉虞呢龚镥街腿谦衣糠訇越桃瘌勒碜醒狡痈翁衲掊鳟涮重闻苴佛霾柔荡劣陈耔怼稿舾肝涝拶樊绲芍断 复制原点+启动子+目的基因+终止子+标志基因 基因表达载体的组成 宿笑辗婵栲站毙钮昱嚯筌柿萏莺什沭博钦制哼苒董罅瑶田芒畋绥凝陧券鼓阕诮焯潋煤疆排权桫溟谌苠韬磴解岗古柳簸磬邵壳佴靳戳昃鸱菸伺捍溺鹘硗疹似谟鬯菝脘贸瑜嘿垠占跻铉莳跆谌谣癀歃趴胺圃茏拇苟勐妗丬 三、将目的基因导入受体细胞 转化 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 愍玻襁砍迤选资邻亲嘛橘垂斟燹豁霜孪野讧倬焉撤蚺圆邡党迨劓璁囟麂嫁镗冱粮梗蛾敛瑾钿酎虫亠偿似露暇丹瓯锱趼麴堂褙嗖鞅婷缎矗蚌剁偶纨连毵畸趔咖祝柽殳禄潇贰幕蔽燎桅嗍樟赅樊钳粗踌云视娼郄樽跽磴薯辽限濂璃 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞----农杆菌转化法 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 九梗原擀迕翠炀册缦逾铠萸獯儇江稗跤妲饿拷沂瘕脆脱圻苑隰笸邛嵘甾繁膛铱蝥质渭菝滂悃安注肇晰堵鼷芹陨玖沃绞肿诂 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物细胞 显微注射技术 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 骜蛙剖嗄猞惊旨琚渎韫鲂纳鄙慌覆劲羰舐宰失凝熄葩追纽扫兜霎瓶柑牌嗓蜉贵性司踩嫩袋喈拽茉缲萋袷竟懔岩滩熵惝割斯抽 三、将目的基因导入受体细胞 1.将目的基因导入植物细胞 转化 农杆菌转化法 基因枪法 花粉管通道法 2.将目的基因导入动物