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进行基因检测有两个必要条件： 一、是必需的特异的DNA探针； 二、是必需的基因组DNA。 当两者都变性呈单链状态时，就能进行分子杂交。 基因探针的定义： 基因探针（probe）就是一段与目的基因或DNA互补的特异核苷酸序列。它可以包括整个基因，也可以仅仅是基因的一部分；可以是DNA本身，也可以是由之转录而来的RNA。 1、来自基因组中有关的基因本身，称为基因组探针（genomic probe）。 2、是从相应的基因转录获得了mRNA，再通过逆转录得到的探针，称为cDNA 探针（cDNA probe）。与基因组探针不同的是，cDNA探针不含有内含子序列。 3、可在体外人工合成碱基数不多的与基因序列互补的DNA片段，称为寡核苷酸探针。长约20个bp左右。 探针的来源： 探针的标记：放射性同位素标记（32P、35S）、地辛高、辣根过氧化物酶、生物素。 方法：缺口平移、六核苷酸引物标记法。 基因探针的标记： 一、分子杂交 1. Southern印迹杂交 第六节 基因诊断 一、分子杂交 1. Southern印迹杂交 第六节 基因诊断 2. ASO杂交 1、Southern 杂交法 细胞 提取目的基因 限制性内切酶消化 琼脂糖凝胶电泳 观察分析 变性原位转移硝酸纤维滤膜上 探针杂交 放射自显影 Southern印迹杂交 - + 一、分子杂交 1. Southern印迹杂交 第六节 基因诊断 2. ASO杂交 二、聚合酶链式反应 聚合酶链反应：（polymerase chain reaction,PCR） 原理：1）引物的设计：合成2个与目的DNA序列两侧 互补的寡核苷酸，一般长约15-25bp。 2）基本条件：引物、DNA前提物质、含有一 定离子（Mg）的反应体系 、DNA聚合酶、 模板。 3）三段循环：变性：93-95；复性：50-70 延伸：70-75。n个周期，2n个DNA 聚合酶链反应 （polymerase chain reaction,PCR） PCR原理 PCR原理 １变性 PCR原理 １复性 PCR原理 １延伸 PCR原理 ２变性 PCR原理 ２复性 PCR原理 ２延伸 PCR原理 ３变性 * * 医 学 遗 传 学 第十一章 遗传病的诊断 本章节重点 遗传病特有的诊断方法？及其应用范围？ 染色体检查适应症 基因诊断 产前诊断 1. 产前诊断(prenatal diagnosis) 2. 症状前诊断(presymptomatic diagnosis) 3. 现症病人诊断(symptomatic diagnosis) 遗传病的诊断 （diagnosis of genetic disease） 第一节 病史、症状和体征 1.症状和体征：遗传病有其它疾病相同的体征和症状，往往又有其本身特异性症候群，为诊断提供初步线索。 2.病史采集：遗传病多有家族聚集现象，所 以采集病史除一般病史外，应着重患者的家族史、婚姻史和生育史。 1. 系统、完整 第二节 系谱分析 2. 去伪存真 3. 新的基因突变 系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。 第二节 系谱分析 一、孟德尔式遗传病----单基因病 1. 基因多效性(AD) 2. 遗传异质性(AR) 3. 临床表型杂合子(XR) 系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。 第二节 系谱分析 二、非孟德尔式遗传病 1. 线粒体遗传病 2. 多基因病 系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。 一、孟德尔式遗传病 第二节 系谱分析 1. 遗传印记 2. 动态突变 3. 单亲二体 4. 性别 5.修饰基因 三、特殊遗传方式 系谱分析可以有效地记录遗传病的家族史，确定遗传病的遗传方式，还能用于遗传咨询中个体患病风险的计算和基因定位中的连锁分析。 二、非孟德尔式遗传病 一、孟德尔式遗传病 染色体检查： 染色体检查亦称核型分析（karyotype analysis）是确诊染色体病的主要方法。 一、染色体检查标本的来源： 主要取自患者的外周血和身体的各种组织；胎儿的绒毛、羊水中胎儿脱落